奇果菌素诱导卵巢癌细胞自噬形式死亡及机制研究

发布时间：2018-10-13 15:08

【摘要】：研究背景及目的:卵巢癌(ovarian cancer,OC)在妇科恶性肿瘤中病死率高居首位,发病率仅次于宫颈癌、子宫内膜癌,其中上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)比例约85%~90%。由于早期卵巢癌(FIGO分期Ⅰ-Ⅱ期)无明显的临床症状和体征,多数卵巢癌患者在初诊时已发展为晚期(FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期),伴有腹胀、腹水、腹腔癌灶播散种植等症状。上皮性卵巢癌的经典治疗方案以手术为主,术后辅以铂类为基础的化疗等综合治疗。绝大多数进展期病人(约70%~80%)在治疗后最终会发生远处转移,导致其5年总生存率较低(约30%～40%)。另外术后化疗等综合治疗有较大的副作用,如恶心、呕吐、骨髓抑制、疲乏、脱发等,严重影响患者生活质量,并在一定程度上阻碍了术后辅助治疗的进展,甚至很多患者出现铂类耐药等现象。因此,寻找新型的、有效的以及毒副反应低的抗卵巢癌药物,对提高其治疗的有效率、改善其预后及逆转卵巢癌化疗耐药等是十分有必要的。奇果菌素(Grifolin,2-trans,trans-farnesyl-5-methylresorcinol),是一种从可食用的美洲蘑菇菌类地花菌(Albatrellus confluens)中萃取出来的次代代谢产物,类属于担子菌类。最初奇果菌素被验证具有降低血浆胆固醇浓度的功能,随后大量实验证实其强效的抗炎、抗病毒、免疫调节及抗癌活性,其中抗癌机制被广泛深入研究,已有研究发现奇果菌素发挥抗癌活性的机制包括抑制癌细胞的增殖、阻滞细胞周期、促进细胞凋亡、抑制癌细胞黏附、侵袭及迁移等。但在上皮性卵巢癌中抗癌活性及其机制尚未见报道。本文旨在研究奇果菌素对上皮性卵巢癌细胞系A2780和SK-OV-3增殖、自噬等能力的影响并对其作用机制进行初步探讨。研究方法:1.MTT法检测不同浓度奇果菌素作用A2780和SK-OV-3两种细胞不同时间的生存率。2.流式细胞学吖啶橙染色法检测自噬囊泡、荧光显微镜下GFP-LC3自噬小体集合法、电镜检测自噬体等方法验证奇果菌素对A2780和SK-OV-3细胞系的自噬作用。3.Western-blot法、免疫荧光法检测奇果菌素对A2780和SK-OV-3细胞中自噬相关蛋白分子的表达量以及自噬相关的Akt/mTOR/S6K信号通路中靶蛋白分子表达的调节。4.应用自噬抑制剂氯喹及敲除自噬靶点分子LC3B,通过MTT法、流式细胞技术及Western-blot法反向证明奇果菌素对A2780细胞和SK-OV-3细胞的自噬诱导作用。应用统计学软件SPSS 18.0分析实验数据,P0.05统计学有差异。所有实验数据均经过三次不同实验所得,用平均数和标准差的方式表示。研究结果:1.奇果菌素可以抑制卵巢癌细胞增殖能力:MTT法检测奇果菌素作用前后A2780和SK-OV-3细胞的生长率,结果显示:奇果菌素对两种细胞系均有抑制增殖作用,表现出浓度梯度和时间梯度差异(P0.05)。2.奇果菌素可以诱导卵巢癌细胞自噬作用:流式细胞学吖啶橙染色法、GFP-LC3小体集合试验、电子显微镜拍摄自噬体等结果显示:与对照组相比,奇果菌素作用的两种细胞系均检测到自噬的发生。Western-Blot法检测自噬相关靶点分子蛋白表达量、免疫荧光技术检测LC3B分子的荧光表达量,结果显示LC3B、Atg7、Beclin-1上调,P62下调;LC3B荧光亮度上调,验证了上述结果。反向验证法,联合应用自噬抑制剂氯喹、敲除LC3B分子,MTT法检测生存率、流式细胞术吖啶橙染色法检测自噬囊泡形成、Western-blot法检测敲除LC3B前后的A2780细胞和SK-OV-3细胞的自噬作用,进一步证实奇果菌素可以诱导卵巢癌细胞自噬作用,上述结果均具有统计学差异(P0.05)。3.Western-blot法检测奇果菌素诱导卵巢癌细胞系自噬形式死亡相关信号通路:结果显示:与对照组相比,奇果菌素刺激后的细胞系表现出通路靶点分子磷酸化形式的蛋白表达量明显下调(P0.05)。研究结论:1.奇果菌素通过诱导卵巢癌细胞的自噬作用从而达到其促进癌细胞死亡的作用。2.奇果菌素诱导卵巢癌细胞发生自噬形式的死亡是通过抑制Akt/mTOR/S6K信号通路完成的。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.31

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 仲任,黄瑞滨,宋善俊;组织因子途径抑制物2抑制卵巢癌细胞浸润转移的体外研究[J];中华妇产科杂志;2003年10期

2 刘爽;林静娴;刘琦;石群立;王建东;吴元赭;;维A酸干预前后卵巢癌细胞中维A酸受体的表达变化及意义[J];医学研究生学报;2007年11期

3 ;发现休眠卵巢癌细胞存活机制[J];生命世界;2009年02期

4 ;美发现休眠卵巢癌细胞存活机制[J];医学研究杂志;2009年04期

5 向君彦;夏新蜀;王昕娜;徐静;王萍;江园;余和平;白定群;许川山;;低强度中频超声杀伤卵巢癌细胞的初步研究[J];激光杂志;2011年01期

6 陈韵仙;;下泌尿道切除作为卵巢癌细胞减少术的一部分[J];国外医学.妇产科学分册;1983年03期

7 仲任,黄瑞滨,宋善俊;组织因子途径抑制物2对卵巢癌细胞迁徙和浸润能力的影响[J];癌症;2003年10期

8 ;精液能够杀死卵巢癌细胞[J];发明与创新;2003年12期

9 高琨,李力,陈心秋,张玮;雌孕激素对卵巢癌细胞体外生长的影响[J];肿瘤防治研究;2004年04期

10 王威廉,陈心秋,恩帝安,马加萨,周德南,唐凯,黄薇;抗卵巢癌细胞膜抗体对卵巢癌细胞体外细胞毒性试验及荷瘤小鼠的体内聚集性的实验研究[J];广西医科大学学报;2004年04期

相关会议论文 前10条

1 王文霞;孔北华;李鹏;曲迅;;蛋白酶体抑制剂对卵巢癌细胞的作用机制[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年

2 刘娟娟;林蓓;赵越;李飞飞;郝莹莹;张帆;朱连成;张淑兰;;岩藻糖基化抗原对卵巢癌细胞生物学行为的影响[A];东北三省第四届妇产科学术会议论文汇编[C];2008年

3 陈心秋;王威廉;赵芳芳;周德南;唐凯;;~(131)Ⅰ—抗卵巢癌抗体联合外放射对卵巢癌细胞的体外杀伤实验研究[A];第七届广西肿瘤学术年会论文汇编[C];2003年

4 王威廉;陈心秋;恩帝安.马加萨;周德南;唐凯;;抗卵巢癌抗体对卵巢癌细胞体外细胞毒及载瘤裸鼠体内聚集性实验研究[A];第七届广西肿瘤学术年会论文汇编[C];2003年

5 许沈华;牟瀚舟;顾琳慧;朱赤红;刘祥麟;;高转移卵巢癌细胞差异表达基因在染色体定位及其功能[A];浙江省生理科学会2006年学术年会论文汇编[C];2006年

6 唐东平;陈心秋;唐凯;张洁清;贺海平;;11种化疗药物对卵巢癌细胞的抑制作用及其有核细胞细胞毒性研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

7 李晓峰;王欣;马开东;刘宝林;;卵巢癌细胞的低温保存及致死特性研究[A];上海市制冷学会2007年学术年会论文集[C];2007年

8 梁念慈;何太平;覃燕梅;吴科锋;;抗癌草药半边旗有效成分对卵巢癌细胞基因表达的影响[A];第十届全国生化与分子药理学术会议论文摘要汇编[C];2007年

9 郝莹莹;林蓓;赵越;欧阳玲;张淑兰;;α1,2岩藻糖转移酶基因转染对卵巢癌细胞生物学行为的影响[A];中华医学会第九次全国妇科肿瘤学术会议论文汇编[C];2006年

10 李长东;张为远;苑春莉;韩丽英;;卵巢癌细胞对人树突状细胞成熟及功能的影响[A];中华医学会第一届全球华人妇产科学术大会暨第三次全国妇产科中青年医师学术会议论文汇编[C];2007年

相关重要报纸文章 前4条

1 记者 任海军;卵巢癌为何常常复活？生死命悬一基因[N];新华每日电讯;2009年

2 靖九江;4-HPR有望用于治疗卵巢癌[N];中国医药报;2005年

3 邰 举;韩国医学专家发现精液能够杀死卵巢癌细胞[N];中国中医药报;2003年

4 邰举;精液能够杀死卵巢癌细胞[N];科技日报;2003年

相关博士学位论文 前10条

1 王萍;丙泊酚对卵巢癌细胞侵袭和紫杉醇诱导的卵巢癌细胞凋亡的作用中转录因子Slug的影响[D];山东大学;2015年

2 魏星;CGI-58基因调控脂代谢介导卵巢癌细胞侵袭转移的作用及机制研究[D];第三军医大学;2015年

3 项喜艳;去乙酰化酶SIRT3调控卵巢癌细胞代谢增加BH3模拟物S1凋亡敏感性的研究[D];吉林大学;2016年

4 杨秋云;NEDD4L在卵巢上皮癌的表达及作用研究[D];吉林大学;2016年

5 王燕;糖皮质激素对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制研究[D];第二军医大学;2016年

6 龙启芳;肿瘤干细胞靶向杀伤病毒表达系统对卵巢癌细胞生物学性状影响的研究[D];南京医科大学;2017年

7 赵U，

本文编号：2269057