金雀异黄素抑制宫颈癌Hela细胞增殖迁移作用及其机制的研究

发布时间：2018-10-14 16:45

【摘要】：金雀异黄素是大豆中的主要成分,是大豆异黄酮的主要活性物质,同时也是一种酪氨酸酶抑制剂,近来研究报道在中药中也广泛存在。目前已有多项报道研究证明,金雀异黄素作为一种常见的植物雌激素,存在于多种中药中,主要分为三类,分别为补益药、活血化瘀药和其他类,补益药中如菟丝子、淫羊藿、补骨脂、女贞子,活血化瘀药中如丹参、牛膝、红花、王不留行,其他如大豆、葛根等也已被报道含有金雀异黄素成分。作为一种常见的植物雌激素,金雀异黄素具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化的作用,对多种肿瘤均有广泛治疗效果。宫颈癌作为一种恶性程度高、发病率高的常见肿瘤,正危害着广大女性的生殖健康,特别是年轻女性健康。目前主要根据临床具体情况,选择手术治疗,放、化疗和中医药治疗等单独使用,或者联合治疗。手术治疗虽然是目前最有效可行的诊治方案,但手术主要适用于Ⅱa期以下的早期患者,并要求患者无严重内外科合并症和无手术禁忌症,对于晚期患者,已有转移或者不能耐受手术治疗的患者具有局限性。放射疗法可单独发挥作用,也可伴随外科手术同时进行,适用于癌变晚期患者及不能耐受手术者。但放射治疗仍然有其局限性,放射治疗对宫颈癌并不十分敏感且对周围正常组织具有毒性,易产生多项并发症,并且研究证明放射治疗并不能延长其生存率。化学治疗更是对心、肝、肾等脏器具有毒副作用,并且会产生耐药性,治疗效果也不尽人意。因此寻找一种能有效提高患者存活率且不良反应较小的抗肿瘤药物,是目前研究的热门方向。目前,研究中草药及其有效成分作为抗肿瘤药物已成为宫颈癌治疗的热点之一。本次研究中,我们从10种抗肿瘤中药有效成分中筛选出了金雀异黄素作为研究对象,主要探究了金雀异黄素对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用以及机制探讨。研究内容分为三部分:第一部分多种抗肿瘤中药成分的筛选目的:探讨10种抗肿瘤中药有效成分对人宫颈癌Hela细胞的作用,进而筛选出具有显著抑制其细胞增殖的药物进行下一步深入研究。方法:通过CCK-8细胞增殖实验分别对人宫颈癌Hela细胞进行10种抗肿瘤中药有效成分的筛选。结果:1、多种待筛物对人宫颈癌Hela细胞的活性抑制作用不一,并非所有的待筛物均具有抑制作用。2、多种待筛物中,当药物为高浓度100μM时,金雀异黄素、淫羊藿苷、隐丹参酮、厚朴酚、莪术醇、齐墩果酸以及丹参酮Ⅰ抑制作用有显著差异(p0.01)。3、其中金雀异黄素的CCK-8实验结果显示,金雀异黄素的抑制细胞活性的作用与药物浓度和刺激时间有关,并且,高浓度(100μM)的抑制作用明显,而低浓度(12.5-50μM)对细胞活性没有明显的作用。结论:通过查找文献,找出了 10种具有抗肿瘤效果的中药有效成分,对宫颈癌细胞通过细胞增殖实验的方法进行筛选,筛选得到金雀异黄素、淫羊藿苷、隐丹参酮、厚朴酚、莪术醇、齐墩果酸以及丹参酮Ⅰ具有抑制细胞增殖的作用,由于金雀异黄素作用较为显著、并且目前文献报道不多,因而选其进行下一步深入研究。第二部分金雀异黄素抑制宫颈癌Hela细胞的增殖迁移作用的研究目的:研究不同浓度的金雀异黄素抑制宫颈癌Hela细胞的增殖迁移的作用。方法:通过CCK-8细胞增殖实验、细胞计数以及集落实验分别探讨其对Hela活性的影响:通过划痕实验、粘附实验以及Transewell小室实验分别探讨其对细胞迁移、侵袭的影响。结果:1、通过CCK-8以及细胞计数,发现金雀异黄素对Hela细胞活性的影响与药物浓度和刺激时间有关,高浓度(1OOμM)在24h和48h时明显抑制细胞增殖作用,而低浓度(12.5-50μM)对细胞活性没有明显作用;通过细胞集落实验,发现金雀异黄素(25-100μM)与溶剂对照组相比,细胞不形成团块状,具有明显抑制细胞集落形成的作用,这一结果表明,不同浓度的金雀异黄素(25-100μM)均能够抑制宫颈癌Hela细胞增殖。2、通过细胞粘附实验,发现金雀异黄素明显能够抑制Hela细胞的粘附,并且与药物浓度呈正相关。3、通过划痕实验,发现金雀异黄素具有抑制Hela细胞迁移的作用。4、通过Transewell小室实验进一步验证了金雀异黄素具有抑制Hela细胞迁移、侵袭的作用。结论:金雀异黄素具有抑制宫颈癌Hela细胞增殖、粘附、迁移和侵袭的作用,并且与药物浓度和刺激时间有关。第三部分金雀异黄素抑制宫颈癌Hela细胞增殖迁移作用机制的研究目的:从蛋白以及基因表达水平上探讨在FAK-paxillin信号通路中,金雀异黄素抑制宫颈癌Hela细胞增殖、粘附、迁移和侵袭的作用机制。方法:通过Western blot探究其蛋白表达情况,通过RT-PCR探究其mRNA表达情况。结果:1、不同浓度的金雀异黄素能够抑制磷酸化FAK、paxillin的蛋白表达和β-catenin、Vimentin的蛋白表达。2、不同浓度的金雀异黄素能够抑制磷酸化p38和p42/44的蛋白表达。3、不同浓度的金雀异黄素能够抑制FAK、paxillin、Snail和TwistmRNA的表达。结论:金雀异黄素是通过抑制了 FAK-paxillin信号通路在蛋白、基因层面上的表达,从而抑制了宫颈癌Hela细胞的增殖、粘附、迁移和侵袭作用,该RNA、蛋白调节网络的靶向治疗对宫颈癌的诊疗提供了新的可能性。
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【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.33

【参考文献】