NG2在肝癌中的表达以及与患者预后相关性研究

发布时间：2018-10-20 19:28

【摘要】：背景:原发性肝癌是一种非常常见的恶性肿瘤,在中国的发病率和死亡率已成为世界上最高的,据估计全世界每年有55%的新增病例和死亡。肝癌是包括指原发性肝癌和继发性肝癌,而发病机制尚未明确的原发性肝癌有更高的发病率和致死率,因此对人类健康造成很大的危害。全球肝癌发病率存在着地区差异。经济欠发达的一些亚洲、非洲地区,发病率极高。据统计,中国的肝癌病人数约占全世界的50%。目前肝癌的治疗方案主要取决于疾病的分期、残余肝功能及患者身体状况。手术治疗对于早期肝癌是最好的治疗方法。然而,由于绝大多数肝癌患者在肝癌早期阶段并无明显的临床表现,因而未引起患者的足够重视,等至肝癌确诊时肿瘤已发生扩散或远处转移,失去了手术机会。而即使经过了手术治疗患者的5年生存率也不到35%。为了改善患者的术后预后和生活质量,关键是寻找一个与肝癌进展、侵袭、转移和复发密切相关并影响患者预后的独立危险因素。NG2是一种硫酸软骨素蛋白多糖(chondroitin sulphatepeoteoglycan,CSPG),存在于许多祖细胞表面具有完整跨膜结构的I型跨膜蛋白。虽然在人类的正常组织中有表达,但表达量微乎其微,然而在胰腺癌、恶性黑色素瘤、胃癌、大肠癌等许多人类癌症和软组织肉瘤、胶质瘤、星形细胞瘤和髓系白血病中都普遍存在过度表达的现象。另外,NG2在皮肤的鳞状细胞癌和基底细胞样乳腺癌的肿瘤干细胞中表达,这说明NG2与肿瘤的发生、发展、复发和转移有关。虽然NG2并非癌基因,但在癌基因相关的信号通路中,NG2可以发挥激活信号通路、连接信号分子的作用。例如,NG2可以调节细胞粘附于胶原蛋白等细胞外基质(ECM)成分从而为肿瘤细胞的侵袭转移提供成熟的微环境。在恶性分化细胞、祖细胞及各种肿瘤干细胞的细胞膜上均有NG2高表达,而且NG2在这些细胞生长,迁移过程中起着至关重要的作用。在正常成人的大脑组织内,虽然仅有5%的神经细胞表达NG2,但却具有广泛的解剖分布,在循环系统,超过70%祖细胞高度表达NG2[8]。在神经系统的NG2+细胞具有更强的增殖和自我更新能力,无论在正常情况还是在病理条件下均能分化为不同类型的神经细胞。目前尚无确切研究表明肝癌细胞的侵袭和转移机制中是否有NG2分子的参与。因此,本研究将探讨NG2在肝癌组织中的表达情况,分析其与肝癌的临床病理指标、复发和生存率是否具有相关性,以及它是否可以作为一种有效的临床预后评价指标,为其临床诊疗、预后判断提供更多的一些依据。目的:采用ihc、rt-pcr、wb方法从蛋白和mrna水平检测ng2蛋白的表达水平,探讨在肝癌中ng2的表达水平与患者临床病理参数的相关性以及ng2在肝癌患者预后评估中的作用和意义。方法:1.根据免疫组化染色的阳性细胞数目以及染色强度对ng2的表达量进行半定量分析,采用免疫组化染色的方法对132例肝癌标本以及96例癌旁组织标本的ng2蛋白表达量进行分析。为了确定免疫组化的染色结果,采用qrt-pcr和westernblot对肝癌和癌旁组织中的ng2蛋白表达进一步分析验证;2.ng2蛋白表达量与肝癌临床病理参数相关性的分析采用卡方检验,ng2表达量与肝癌患者生存率的相关性采用kaplan-meier法分析并用log-rank检测;3.为了进一步确认ng2评价作用,采用cox多元线性回归分析所有涉及的临床病理指标,评估其对肝癌患者总体生存和无瘤生存率的影响。结果:1.根据分析发现在肝癌标本中高表达ng2蛋白者占据所有肝癌标本的63.6%(84/132)然而癌旁组织标本中高表达ng2蛋白者占据所有癌旁标本的28.1%(27/96)。ng2蛋白在肝癌中的表达量显著高于癌旁组织具有统计学意义(p0.0001)。2.采用卡方检验或者fisher确切概率法检验分析发现肝癌患者的肝癌组织中ng2蛋白的表达量与肿瘤的分化程度(x2value=9.436,p=0.0089),是否复发(x2value=5.769,p=0.0163),tnm分期(x2value=8.976,p=0.0027),以及有无血管侵袭(x2value=5.476,p=0.0193)密切相关具有统计学意义。然而分析发现肝癌患者的肝癌组织中ng2蛋白的表达量与年龄、性别、肿瘤大小、血清afp水平、肿瘤大小以及肿瘤有无包膜没有统计学意义上的相关性。log-rank检验发现肝癌患者的肝癌组织中ng2蛋白的表达量与肝癌患者的生存率有统计学相关性。高表达ng2蛋白的肝癌患者其总体生存率要显著低于低表达ng2蛋白的肝癌患者(29.2%vs9.5%,p0.001)。而且,高表达ng2蛋白的肝癌患者其无瘤生存率要显著低于低表达ng2蛋白的肝癌患者(15.2%vs6.7%,p0.001)。3.cox多元线性回归发现ng2表达量(hr=2.035,p=0.002),血清afp水平(HR=1.903,p=0.003),TNM分期(HR=2.039,p=0.001),以及有无血管侵袭(HR=1.938,p=0.002)是影响肝癌患者总体生存率(OS)独立危险因素。与此同时,NG2表达量(HR=1.974,p=0.003),血清AFP水平(HR=1.767,p=0.008),TNM分期(HR=2.078,p=0.001),肿瘤有无包膜(HR=0.652,p=0.045),以及有无血管侵袭(HR=1.941,p=0.002)是影响肝癌患者无瘤生存率(DFS)的独立危险因素。结论:1.经过免疫组化、western blot、以及PCR分析发现NG2在肝癌中的表达量显著高于癌旁组织具有统计学意义;2.NG2在肝癌中的表达量与肿瘤分化程度、肿瘤复发、TNM分期以及侵袭具有统计学意义上的相关性;3.肝癌患者的肝癌组织中NG2蛋白的高表达与不良预后密切相关。因此,NG2蛋白可以作为一种辅助传统方法有效评估肝癌预后的指标。
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【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

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