【摘要】：目的:探讨柯里拉京对肝癌细胞系SMMC-7721和MHCC97H迁移、侵袭的影响,初步阐明柯里拉京抑制SMMC-7721和MHCC97H细胞迁移、侵袭的的作用方式及分子机制。方法:(1)常规培养SMMC-7721和MHCC97H细胞,MTT实验中,用不同浓度柯里拉京检测其抑制细胞SMMC-7721和MHCC97H细胞的活力作用。(2)采用划痕实验法,检测不同浓度柯里拉京作用于SMMC-7721、MHCC97H细胞的伤痕愈合宽度。(3)采用transwell细胞迁移实验,检测柯里拉京作用下SMMC-7721、MHCC97H细胞的迁移数目。(4)采用transwell细胞侵袭实验,检测柯里拉京作用下SMMC-7721、MHCC97H细胞的侵袭数目。(5)采用免疫荧光染色,检测柯里拉京作用下SMMC-7721、MHCC97H细胞细胞骨架、丝状伪足、片状伪足的影响。(6)采用western blot,检测柯里拉京作用于SMMC-7721和MHCC97H细胞的EMT相关蛋白(E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Vimentin)以及 MAPK 信号通路相关蛋白(ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、P38、p-P38)的影响。结果:(1)MTT实验显示柯里拉京对SMMC-7721和MHCC97H细胞抑制作用的具有浓度依赖关系,提示两种细胞对柯里拉京的敏感性有差异,并且MHCC97H细胞对柯里拉京更为敏感,并MMC-7721细胞活力在柯里拉京浓度为300μmol/L时抑制作用明显,而MHCC97H细胞活力在200μmol/L明显被抑制。(2)划痕迁移实验显示,柯里拉京对两种肝癌细胞SMMC-7721和MHCC97H细胞的抑制呈现浓度、时间依赖。(3)Transwell细胞迁移实验显示,柯里拉京抑制SMMC-7721和MHCC97H细胞的迁移,浓度越高,抑制迁移作用越显著,柯里拉京在50、100、200 μmol/L时,对SMMC-7721迁移能力的抑制率分别为45.20%、52.03%、62.09%,与空白组比较,柯里拉京对SMMC-7721细胞的迁移能力均有明显的抑制作用(p0.05;柯里拉京在30、60、120μmol/L时,对MHCC97H细胞迁移能力的抑制率分别为13.62%、51.38%、64.77%,空白组比较,60、120 μnol/L柯里拉京对MHCC97H细胞的迁移能力有明显的抑制作用(p0.05),但30μmol/L柯里拉京对MHCC97H细胞迁移能力无明显影响(p0.05)。(4)Transwell细胞侵袭实验显示,柯里拉京抑制SMMC-7721和MHCC97H细胞的侵袭,浓度越高,抑制侵袭作用越显著,柯里拉京在50、100、200 μmol/L浓度时,对SMMC-7721侵袭能力的抑制率分别为7.82%、25.23%、60.09%,与空白组比较,50、100、200μmol/L柯里拉京对SMMC-7721细胞的侵袭能力均有明显的抑制作用(p0.05);柯里拉京在30、60、120μmol/L浓度时,对MHCC97H细胞侵袭能力的抑制率分别为25.20%、38.96%、71.19%,与空白组比较60、120μmol/L柯里拉京对MHCC97H细胞的侵袭能力有明显的抑制作用(p0.05),但30μmol/L柯里拉京对MHCC97H细胞侵袭能力无明显影响(p0.05)。(5)利用免疫荧光染色,柯里拉京可使SMCC-7771和MHCC97H中F-actin骨架发生重塑,浓度越高,细胞边缘的丝状伪足和片状伪足形成逐渐减少、张力纤维数目逐渐减少,这种影响在SMMC-7721为200 μmol/L时显著,而MHCC97H为120μmol/L 为明显。(6)Western Blot显示,柯里拉京可显著下调SMMC-7721和MHCC97H细胞EMT中 N-cadherin 和 Vimentin 的表达(p0.05),而 E-cadherin、β-catenin 蛋白表达的没有显著改变;柯里拉京可下调SMMC-7721和MHCC97Hp-ERK的表达(p0.05)、上调 p-P38 表达(p0.05),p-JNK、JNK,ERK、P38 等表达的改变没有显著改变。结论:(1)柯里拉京抑制肝癌细胞SMMC-7721和MHCC97H细胞的迁移及侵袭。(2)柯里拉京抑制肝癌细胞SMMC-7721和MHCC97H的迁移及侵袭,其机制可能是通过抑制EMT中的N-cadherin、Vimentin蛋白表达影响细胞骨架重塑来实现。(3)柯里拉京抑制肝癌细胞SMMC-7721和MHCC97H的迁移及侵袭,其机制可能是通过调控ERK通路介导EMT影响细胞骨架的重塑的而实现。
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【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7
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