上皮细胞粘附分子与肝细胞癌复发、转移的相关性研究

发布时间：2018-10-31 10:20

【摘要】：目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的异质性和缺乏适宜的生物学标记物,阻碍了对HCC预后的判定与治疗方案的确定。上皮细胞粘附分子(epithelial cell adhesion molecule, EpCAM)被认为是HCC早期的生物标志。本文的目的是研究EpCAM在HCC中的分布特点及表达水平与HCC复发、转移及预后的关系,并探讨EpCAM分子影响HCC生物学行为的机制。方法(1)构建EpCAM原核及真核表达质粒，并鉴定其表达与特征。(2)收集2006年4月～2009年7月确诊为HBV相关性HCC的153例患者的临床与随访数据,应用免疫组织化学及免疫荧光方法检测EpCAM胞外域(EpEX)胞内域(EpICD)在HCC中的表达情况,回顾性分析其与HCC患者复发、转移及预后的关系。(3)收集2013年8月～2014年1月34例行肝癌根治切除术的HCC患者的临床与随访数据,采集患者术前血浆及术中肝癌组织；应用双标准曲线相对定量荧光PCR方法检测HCC组织中EpCAM mRNA的表达水平；酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HCC患者血浆中EpEX水平,分析其与HCC患者临床特征及肝癌复发的关系。(4)应用EpCAM胞外域及胞内域序列的特异性shRNA干扰Huh7细胞EpCAM的表达，应用CCK8法检测细胞增殖能力、流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率、细胞划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果(1)从HCC患者的肝癌组织标本中成功扩增出EpCAM全基因序列,成功构建了EpCAM原核及真核表达质粒。(2)153例HCC组织切片,EpEX膜表达阳性率16.99%,EpICD核、浆表达阳性率分别为59.48%、100%；HCC癌组织EpEX膜表达及EpICD核表达阳性率均高于癌旁组织(16.99% vs 7.84%,p=0.015；59.48% vs 15.03%,p0.001),而癌组织与癌旁组织EpICD胞浆表达阳性率无差异(100% vs98.69%,p=0.156)。EpEX膜表达及EpICD核表达与肝癌分期不相关(p=0.282,p=0.097)。HCC患者年龄与EpEX膜表达阳性率呈负相关,患者年龄低者EpEX膜表达阳性率高,而患者年龄高者EpEX膜表达阳性率低。AFP水平与EpEX膜表达阳性率及EpICD核表达阳性率均呈正相关,AFP水平高的患者HCC组织EpEX膜表达阳性率及EpICD核表达阳性率均高。EpEX+EpICD+、EpEX-EpICD-、EpEX+EpICD-EpEX-EpICD+四组HCC患者的中位无瘤生存期分别为：19、6、3、6个月；中位生存期分别为：46、42、28、28个月；四组HCC患者的无瘤生存率及总生存率均有统计学差异(P=0.008,p=0.041)；EpEX+EpICD-组易早期复发,其无瘤生存率、术后总生存率低于EpEX-EpICD-组(p=0.007,p0.001)及EpEX+EpICD+组(P0.001,p=0.004)。HCC初次复发的特点为以肝内复发为主,占总复发例数的62.20%：而EpEX-EpICD+组HCC发生血管和肝外复发的比例(50%)高于其它组别(EpEX+EpICD+组37.5%、EpEX-EpICD组24%，EpEX+EpICD-组0%)。(3)HCC癌组织及癌旁组织EpCAM mRNA表达量的归一化值(中位数分别为13.50×10-4、57.00×10-4)均高于正常肝组织(中位数700×10-4,p0.05,p0.01),而癌旁组织mRNA表达量高于癌组织(p0.05)。HCC组织EpCAM mRNA高水平表达者多见于年轻和有镜下血管癌栓的患者,且与低水平表达组相比更易复发(1年复发率52.94% vs 17.6%),无瘤生存率更低(P＝0.039)。HCC患者血浆EpEX检出率为11.36%,可检出EpEX浓度均值5703.92±8846.46pg/ml(61.49～18723.08 pg/m1),与正常人血浆中的EpEX水平(240.87±112.97pg/m1)比较无统计学差异(p=0.34)。(4)应用EpEX及EpICD特异性shRNA干扰Huh7细胞EpCAM的表达,导致细胞周期S期比例降低、G2期比例升高、细胞凋亡率升高,细胞增殖、迁移及侵袭能力减弱。结论(1)HCC组织EpEX+EpICD-与HCC患者早期复发及生存率降低相关；而EpEX-EpIC D+组HCC易于发生血管侵犯和肝外复发。(2)HCC患者肝癌组织EpCAM mRNA高水平表达可预测HCC的复发；由于HCC患者血浆样本量及EpEX检出率有限,对于HCC预后判断的意义不大。(3) ShRNA干扰EpCAM的表达能够降低肝癌细胞的体外增殖、迁移及侵袭能力,并影响细胞周期分布和凋亡率,为HCC的EpCAM抗体靶向治疗提供了理论依据。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

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本文编号：2301813