乌索酸对T细胞淋巴瘤增殖抑制作用及机制的体外研究

发布时间：2018-11-01 14:43

【摘要】：目的:本研究旨在探讨乌索酸(Ursolic acid)对T淋巴瘤细胞株Hut-78和Jurkat增殖的体外影响及可能作用机制。方法:1.用四甲基偶氮唑盐(MTT,Methyl thiazolyl tetrazolium)法研究10,20,40和80μmol/L的乌索酸作用不同时间(4,12,24,48,72h)对Hut-78和Jurkat细胞株增殖的抑制作用;2.用AnnexinⅤ/PI-FITC标记10,20,40和80μmol/L的乌索酸作用4,24,72h后的Hut-78和Jurkat细胞,并用流式细胞仪分析,检测AnnexinⅤ+/PI-细胞比例,了解其凋亡的情况;3.用免疫印迹法(western blot)检测10,20,40和80μmol/L的乌索酸作用72h前后的Hut-78和Jurkat细胞的细胞核因子-κB(NF-κB,nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)p65亚基、p50亚基、p52亚基和p100亚基蛋白表达;用western blot法检测10,20,40和80μmol/L的乌索酸作用72h前后的Hut-78和Jurkat细胞半胱天冬蛋白酶-8(caspase-8),caspase-9,caspase-3和蛋白的表达;4.用酶联免疫吸附(ELISA,enzyme linked immunosorbent assay)法检测用10,20,40和80μmol/L的乌索酸作用72h前后的Hut-78和Jurkat细胞上清液血管内皮生长因子(VEGF,vascular endothelial growth factor)和环氧化物酶-2(COX-2,cyclooxygenase-2)的含量;反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR,reverse transcription-polymerase chain reaction)检测10,20,40和80μmol/L的乌索酸作用72h前后的Hut-78和Jurkat细胞VEGF和COX-2的m RNA表达;5.取10,20,40和80μmol/L的乌索酸作用72h前后的Hut-78和Jurkat细胞培养上清液与人脐静脉内皮细胞株(HUVEC,human umbilical vein endothelium cell line)细胞株共同培养24h,检测Matrigel培养体系的HUVEC形成管腔数;结果:1.MTT法显示乌索酸对Hut-78和Jurkat细胞株增殖有抑制作用(p0.05),且和药物浓度和作用时间有关(p0.01);2.流式细胞仪分析经乌索酸处理后两种细胞凋亡增加(p0.05),且和药物浓度和作用时间有关(p0.01);3.乌索酸处理72h后的Hut-78和Jurkat细胞NF-κB p65和p50蛋白表达下降(p0.05),和药物浓度有关(p0.01),但NF-κB p100蛋白和p52蛋白表达下降不明显(p0.05);乌索酸处理72h后的Hut-78和Jurkat细胞后的caspase-8、caspase-3和caspase-9蛋白表达增加(p0.05),和药物浓度有关(p0.01);4.乌索酸处理72h后的Hut-78和Jurkat细胞上清液VEGF和COX-2含量下降(p0.05),和药物浓度有关(p0.01);乌索酸处理72h后的Hut-78和Jurkat细胞后VEGF和COX-2 m RNA表达下降(p0.05),和药物浓度有关(p0.01);5.乌索酸作用72h后的Hut-78和Jurkat细胞培养上清液与HUVEC细胞株共同培养后,发现Matrigel培养体系的管腔数较对照组减少(p0.05),和药物浓度有关(p0.01)。结论:1.乌索酸对T淋巴瘤细胞株Hut-78和Jurkat增殖抑制作用可能与促其凋亡(死亡受体和线粒体途径)和抑制血管新生有关;2.乌索酸作用机制可能是通过NF-κB经典途径完成。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of ursolic acid (Ursolic acid) on the proliferation of T lymphoma cell line Hut-78 and Jurkat in vitro and its possible mechanism. Methods: 1. The inhibitory effects of ursolic acid on the proliferation of Hut-78 and Jurkat cell lines were studied by MTT,Methyl thiazolyl tetrazolium) assay. Annexin 鈪，

本文编号：2304233