吉非替尼诱导p27核转位并激活半胱天冬酶8促进NSCLC细胞凋亡的机制

发布时间：2018-11-03 16:27

【摘要】：目的探讨吉非替尼诱导的p27蛋白表达改变和核转位及半胱天冬酶(Caspase)8的激活对表皮生长因子受体(EGFR)突变的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞周期阻滞和细胞凋亡的影响及作用机制。方法选取存在19号外显子缺失突变的对吉非替尼敏感的NSCLC细胞系HCC827,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法和流式细胞术分别检测吉非替尼在不同浓度和时间下对细胞活性的影响。利用Western印迹检测p27蛋白和Caspase及其他相关蛋白的相对含量。通过免疫荧光法观察p27蛋白的亚细胞定位。采用蛋白免疫共沉淀验证p27蛋白和Caspase8之间的相互作用。结果吉非替尼浓度-时间依赖性促进了HCC827细胞凋亡。当吉非替尼干预18 h后,细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制因子p27蛋白表达开始出现显著升高(P0.05),且p27蛋白在此过程中伴随从细胞核到细胞质的核转位现象,而促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关x蛋白(Bax)和Bad及抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl/白血病-x基因长片段(Bcl-xl)在吉非替尼干预后表达并未发生显著改变。此外,细胞质中p27蛋白与Caspase8的降解中间体p43/p41结合从而抑制其自身细胞质向细胞核易位。结论推断吉非替尼通过调节p27蛋白的亚细胞定位及Caspase8之间的相互作用,从而达到促EGFR突变的NSCLC细胞凋亡的效果。
[Abstract]:Objective to investigate the changes of p27 protein expression induced by gefitinib, nuclear translocation and activation of cysteinase (Caspase) 8 on (NSCLC) cell cycle arrest and apoptosis in non-small cell lung cancer (NSCLC) with (EGFR) mutation of epidermal growth factor receptor (EGF). And its mechanism. Methods NSCLC cell line HCC827, sensitive to gefitinib, with exon 19 deletion mutation was selected. The effects of gefitinib on cell activity at different concentrations and time were determined by 3- (4- (4-) -dimethylthiazole-2) -2-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and flow cytometry. The relative contents of p27 protein, Caspase and other related proteins were detected by Western blot. The subcellular localization of p27 protein was observed by immunofluorescence. The interaction between p27 protein and Caspase8 was examined by immunoprecipitation. Results Gifitinib promoted the apoptosis of HCC827 cells in a concentration-time dependent manner. The expression of p27 protein of cyclin dependent kinase (CDK) inhibitor began to increase significantly after 18 h intervention by gifitinib (P0.05), and p27 protein was accompanied by nuclear translocation from nucleus to cytoplasm during the treatment. However, (Bax) and Bad of (Bcl) 2 associated x protein and long fragment of Bcl-2 and Bcl/ leukemic X gene (Bcl-xl) of pro-apoptotic protein B cell lymphoma did not change significantly after intervention by gifitinib. In addition, p27 protein in cytoplasm binds to p43/p41, the degradation intermediate of Caspase8, which inhibits its own cytoplasmic translocation to nucleus. Conclusion it is inferred that gefitinib can promote the apoptosis of EGFR mutant NSCLC cells by regulating the subcellular localization of p27 protein and the interaction of Caspase8.
【作者单位】： 湖北省第三人民医院呼吸内科;武汉市第一医院病理科;
【分类号】：R734.2

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本文编号：2308310