MiR-125b在急性髓系白血病中的表达、甲基化态势及在髓系白血病细胞中的功能学研究

发布时间：2018-11-15 23:38

【摘要】：目的探究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中miR-125b基因的表达情况、甲基化水平并进一步分析其临床意义;探究miR-125b在髓系白血病细胞中的生物学意义。方法应用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)方法检测33例正常人与114例AML患者骨髓单个核细胞中miR-125b的转录本水平。应用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)技术对miR-125b启动子的甲基化水平进行检测,应用亚硫酸盐测序(Bisulfite sequencing PCR,BSP)方法进行验证;以质粒为载体,构建稳定过表达miR-125b的白血病细胞株K562,通过细胞计数法与流式细胞术等方法检测miR-125b对白血病细胞增殖、生存、凋亡等生物学功能的影响;通过检测细胞对地西他滨药物的半数抑制浓度(Inhibitory concentration50%,IC50)和加入地西他滨药物处理后细胞生存实验探讨miR-125b参与白血病细胞对地西他滨耐药性作用。结果44/114例(38.6%)AML患者存在miR-125b的过表达,与33例对照组相比,有显著统计学差异(P0.01)。MiR-125b高、低表达组与患者的性别、血红蛋白量、血小板计数、10种基因突变等均无统计学差异(P0.05)。但miR-125b高表达组的患者年龄小于miR-125b低表达组(P=0.05),外周血白细胞计数与原始细胞计数低于miR-125b低表达组(P=0.041和P=0.016)。MiR-125b高、低表达组间的FAB分型、WHO分型、不同核型以及染色体危险程度分型比较差异均有统计学意义(P0.05)。在FAB-M3型患者中,miR-125b表达量显著高与对照组,差异有显著统计学意义(P0.01)。与其他亚型分组[29%(28/97)]比较,M3型分组中miR-125b高表达的频率显著升高[94%(16/17)](P0.01)。而在非M3患者(non-M3-AML)中,miR-125b的表达水平与年龄、性别、血红蛋白量、外周血白细胞计数、血小板计数、染色体分组及10种基因突变等差异均无统计学意义(P0.05)。在总体AML患者中,miR-125b高表达组的化疗后完全缓解(complete remission,CR)率高于miR-125b低表达组(分别为59%和34%,P=0.017)。在non-M3-AML患者中miR-125b高、低表达组间的CR无统计学意义(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示miR-125b高表达组患者的总体生存时间(overall survival,OS)高于miR-125b低表达组(中位数分别为13个月和6个月,P=0.046)。然而,Cox多因素分析表明总体AML患者中miR-125b表达并非是一个独立的预后因素(P=0.213)。在non-M3-AML患者与正常核型AML(cytogenetically normal AML,CN-AML)患者中,miR-125b高、低表达组间的OS均无统计学差异(P0.05)。miR-125b在对照组与AML患者之间启动子甲基化状态无统计学差异(P0.05)。基因转染技术获得稳定过表达miR-125b的K562白血病细胞株。体外细胞功能学实验证明miR-125b促进K562白血病细胞的增殖、生存能力,抑制K562白血病细胞的凋亡。细胞对地西他滨药物的IC50和加入地西他滨药物处理后细胞生存曲线表明miR-125b并没有改变K562细胞对地西他滨药物的反应性。结论(1)MiR-125b的过表达是AML中一个常见的分子事件,并且与FAB-M3型AML患者密切相关。(2)MiR-125b过表达与AML患者预后无关。(3)AML患者中miR-125b启动子无异常甲基化,miR-125b表达水平不受其启动子甲基化调控。(4)MiR-125b促进白血病细胞K562增殖、生存能力,抑制其凋亡能力。(5)MiR-125b没有改变K562细胞对地西他滨药物的反应性。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.71

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本文编号：2334735