基于循环放大技术检测细胞中RNA含量

发布时间：2018-11-19 12:19

【摘要】：第一章,绪论介绍了肿瘤这种顽固疾病及其诱发因素,并对肿瘤标志物进行了介绍,重点介绍了microRNA。还介绍了生化分析中纳米材料的应用,并对荧光分析法和石英晶体微天平等相关分析方法进行了理论和应用的介绍,最后对肿瘤标志物的检测做出了展望。第二章,在制备氧化石墨烯的基础上,以氧化石墨烯吸附单链核酸,并且有猝灭近距离荧光基团的能力为基础,设计了通过Klenow酶实现信号放大,并通过荧光分析法进行RNA检测的方案。经过klenow酶放大后,最低检测浓度达到了1.0×10-11M,对RNA的线性检测范围为1.0×10-11M～1.0×10-9 M,并且通过不同的荧光基团修饰DNA末端,实现了两种RNA的检测。第三章,合成了金纳米粒子,并通过制备氨树高分子,交联得到了金胶纳米簇。使用了双联特异性核酸酶,利用其对RNA与DNA双链中DNA的特异性水解作用,实现对RNA的放大效果,最后使用石英晶体微天平对样品进行分析,对RNA的线性检测范围为1.0×10-11M～1.0×10-9 M,绘制了信号频率变化值对RNA浓度的工作曲线。最后对乳腺癌细胞的全RNA提取物进行了检测,以检测细胞中miR-203 RNA的含量。
[Abstract]:In the first chapter, the introduction introduces the stubborn tumor disease and its inducing factors, and introduces the tumor markers, especially microRNA.. The application of nanomaterials in biochemical analysis was also introduced. The related analytical methods such as fluorescence analysis and quartz crystal microbalance were introduced in theory and application. Finally, the detection of tumor markers was prospected. In the second chapter, based on the ability of graphene oxide to adsorb single-stranded nucleic acid and quench the short distance fluorescence group, the signal amplification by Klenow enzyme was designed. And the scheme of RNA detection by fluorescence analysis. After amplification of klenow enzyme, the lowest detection concentration was 1.0 脳 10 ~ (-11) M, and the linear detection range of RNA was 1.0 脳 10-11M~1.0 脳 10 ~ (-9) M. two kinds of RNA were detected by modifying DNA terminal with different fluorescent groups. In chapter 3, gold nanoparticles were synthesized, and gold colloidal nanoclusters were obtained by preparing ammonia tree polymer. The double specific nuclease was used to hydrolyze the DNA in RNA and DNA double strands to amplify the RNA. Finally, the quartz crystal microbalance was used to analyze the samples. The linear detection range of RNA is 1.0 脳 10-11M~1.0 脳 10 ~ (-9) M.The working curve of signal frequency variation value to RNA concentration is plotted. Finally, the total RNA extracts from breast cancer cells were detected to detect the content of miR-203 RNA in the cells.
【学位授予单位】：青岛科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.4;O657.3

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本文编号：2342283