左、右半结肠癌中Asef2的差异表达与临床病理特点及预后相关性研究

发布时间：2018-11-21 09:47

【摘要】：背景与目的Asef2是近年新发现的鸟嘌呤核苷酸交换因子,可被APC激活增强其鸟苷酸交换活性,并特异性的使下游小G蛋白Rac1和Cdc42活化,从而参与细胞的骨架构建,并与肿瘤细胞的运动、迁移及血管生成密切相关。既往关于该基因为数不多的研究也仅局限于细胞及动物模型实验,目前尚无Asef2在结肠癌组织中表达情况及其与临床病理特征和预后关系的研究。同时,随着结肠癌生物学行为研究的深入,多种癌基因、抑癌基因及遗传表型被发现在左、右半结肠癌中呈现差异表达情况,且同种预后标志物在左、右半结肠癌中呈现不同的预后指示作用,因而,目前有学者质疑结肠癌是否为右半及左半“两脏器”的不同疾病。本研究第一部分拟探讨Asef2在结肠癌组织中的表达情况及其与临床病理的关系,并分组分析Asef2在左、右半结肠癌中的表达情况及其对预后的影响。本研究第二部分通过回顾大宗病例进一步探讨左、右半结肠癌的流行病学特征、临床病理特征及预后的差异。材料与方法本研究第一部分首先选取38例结肠癌与配对的正常上皮组织,通过免疫组化及Western Blot技术从蛋白水平检测癌与癌旁组织中Asef2蛋白的差异表达,并用实时定量RT-PCR从mRNA水平检测癌与癌旁Asef2 mRNA表达量的差异,同时,利用GEO数据库检索,应用高通量寡核苷酸微阵列技术检测癌与癌旁mRNA表达量的差异,丰富并验证本实验研究结果。另外,选取143例预后资料完整的结肠癌组织石蜡切片,通过免疫组化技术检测癌组织中Asef2的表达,探讨其表达情况与临床病理特征的关系,同时分析左右半结肠癌中Asef2是否存在差异表达,分析其对预后的指导意义,再次利用GEO数据库检索高通量数据样本中患者的临床病理及预后资料,完整下载后,整理、分析、验证Asef2在左右半结肠癌中表达的临床及预后意义。本研究第二部分对我院外科收治的1088例结肠癌进行回顾性分析,探讨左、右半结肠癌的流行病学特点及临床病理特征差异,并根据长期随访数据,用Kaplan-Meier法绘制分析不同肿瘤分期中左、右半结肠癌患者的生存曲线,Log-rank法比较生存率差异。进一步通过COX多因素调整后,分析不同临床特征的亚组中左、右半结肠癌的相对死亡风险。另外,根据Ⅰ-Ⅲ期患者术后复发转移情况,分析左、右半结肠癌的复发转移模式。结果Asef2在结肠癌组织中显著上调,Western Blot检测38例新鲜配对结肠癌组织中,32例结肠癌组织Asef2蛋白表达高于其配对的正常上皮组织,表达上调率为84.2%。181例结肠癌组织石蜡切片免疫组化染色结果显示Asef2阳性表达132例,阳性表达率72.9%,而38例正常配对上皮组织中16例出现阳性表达,阳性表达率为42.1%。实时定量RT-PCR共检测了21对结肠癌与配对正常上皮组织Asef2基因的相对表达量,结果显示Asef2在其中15例(71.4%)肿瘤组织中表达上调。GSE10950数据集中结肠癌Illumina Human Ref8-v2芯片检测数据显示24对结肠癌及配对正常上皮组织中19例(79.2%)癌组织Asef2基因表达上调。181例结肠癌免疫组化结果与临床病理资料结合分析发现,淋巴结转移患者中Asef2表达阳性率显著升高(χ2=8.504,P=0.004),左半结肠癌患者Asef2表达阳性率显著高于右半结肠癌(χ2=5.065,P=0.024),进一步在GSE40967数据集中验证得到有淋巴结转移患者及左半结肠癌患者Asef2 mRNA的表达量均显著上调。预后分析显示右半结肠癌中Asef2阳性患者5年无复发生存及总生存均显著低于Asef2阴性表达患者,而左半结肠中Asef2对预后无显著影响。由于Asef2在左右半结肠癌呈现差异表达,且对预后指示作用不同,我们认为左、右半结肠癌的致癌机制可能存在差异,进一步大宗病例回顾分析显示首先左、右半结肠癌在流行病学上存在显著差异,右半结肠癌中高龄患者、女性患者以及肿瘤分期较晚的患者均较左半结肠癌更多见；其次,左、右半结肠癌在病理特征上存在显著差异,低分化及未分化肿瘤(25.2%比13.2%)、粘液分泌(33.5%比17.3%)及脉管瘤栓(9.9%比3.9%)均在右半结肠癌中更多见,差异均有统计学意义(P=0.000)。第三,左、右半结肠癌预后存在差异,右半结肠癌与左半结肠癌患者5年生存率Ⅰ/Ⅱ期分别为91.4%和88.6%(P=0.819),Ⅲ期分别为66.1%和75.4%(P=0.010),Ⅳ期分别为27.8%和38.5%(P=0.020). COX多因素分析显示结肠癌发病部位是患者预后的独立影响因素(OR=1.426,95%CI: 1.100-1.848).第四,左、右半结肠癌复发模式存在差异,左半结肠癌首次复发部位发生于吻合口的比例显著高于右半结肠癌；而右半结肠癌患者首次疾病复发表现为腹膜种植转移的比例则显著高于左半结肠癌。结论Asef2在癌组织及有淋巴结转移的肿瘤组织中显著上调。Asef2在左、右半结肠癌中表达差异显著,Asef2过表达可能作为右半而不是左半结肠癌术后复发转移的分子标志物。Asef2可能在不同部位结肠癌的发病机制中发挥不同的作用。左、右半结肠癌的致癌机制可能存在差异,且流行病学特征、临床病理特征、预后生存及转移复发模式均存在显著不同。在结肠癌研究领域中,尤其是在中晚期结肠癌研究中,左、右半结肠癌应视为两种不同特征的肿瘤进行分别研究。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35

【参考文献】