多靶点抗原肽自体免疫细胞治疗原发性肝细胞癌的免疫应答研究及联合TACE的临床疗效

发布时间：2018-12-11 17:27

【摘要】：研究背景及目的:肿瘤的细胞治疗属于肿瘤生物治疗范畴,旨在通过应用免疫学原理和方法,调节机体的免疫状态从而达到治疗肿瘤的目的。按照不同机制可分为主动性和过继性免疫治疗两大类,被认为是继手术、放化疗之后的又一肿瘤综合治疗方法。原发性肝癌(Primary liver cancer,PLC)是指发生于肝细胞或肝内胆管细胞的恶性肿瘤,主要包括原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)、肝内胆管细胞癌(Intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)和肝细胞癌-肝内胆管细胞癌混合型等不同病理类型,其中HCC约占原发性肝癌的90%。HCC是我国发生率最高的恶性肿瘤之一,恶性程度较高,发病一般非常隐匿,确诊时大多数患者已达BCLC中晚期,从而失去了根治性治疗的机会,预后较差。因此HCC的免疫治疗已成为医学界的研究热点。本研究采用多靶点抗原肽自体免疫细胞治疗技术(multiple antigen stimulating cellular therapy,MASCT)诱导成熟树突状细胞(dendritic cell,DC)和细胞毒性 T 细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),将成熟DC和CTL回输到患者体内,旨在探索MASCT治疗HCC诱导患者体内免疫应答研究及联合TACE的临床疗效。研究方法:1.MASCT诱导原发性肝细胞癌患者体内免疫应答研究分离HCC患者PBMC,贴壁细胞培养分化为非成熟DC,并负载14种抗原肽,加入促成熟因子培养分化为抗原提呈的成熟DC,成熟DC与非贴壁细胞共培养,分化形成抗原特异性CTL。用免疫荧光的方法分析抗原肽是否能被DC内化以及进入胞内的分布情况,并对回输的DC及CTL进行细胞表型及细胞因子检测。用HLA-A2+患者 CTL 和 HCC 细胞系 HepG2 细胞(HLA-A2+)、HuH-7 细胞(HLA-A2-)分别作为效靶细胞进行体外细胞杀伤实验,分析CTL杀伤肿瘤细胞的HLA限制性。前瞻性纳入13例HCC根治术后患者,每个患者预计接受3个疗程MASCT治疗,治疗期间按时随访,患者被诊断肿瘤进展,立即终止研究,转为传统治疗。患者随访期间,采集患者PBMC,分析治疗前后体内免疫应答情况,分别进行(1).T细胞亚群检测;(2).抗原特异性T细胞增殖(Edu染色)及IFN-y水平测定;(3).各抗原单肽特异性免疫应答检测。2.MASCT联合TACE治疗原发性肝细胞癌的临床疗效研究回顾性分析2010-15年南方医院肝病中心收治的66例接受TACE治疗的HCC患者,按是否联合MASCT治疗分为联合治疗组(32例)和单纯TACE组(34例),单纯TACE组采用TACE治疗,联合治疗组在TACE间歇期进行MASCT治疗。主要观察指标为两组患者的无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。探索联合MASCT治疗能否提高TACE的疗效,延长PFS和OS。研究结果:1.MASCT成功诱导培养mDC和CTL,多次治疗后可改善HCC患者体内免疫抑制状况,诱导特异性免疫应答经过上述MASCT细胞培养过程,患者每次接受皮下注射的DC平均2.23 ×107,这些细胞高表达DC成熟信号分子,表现出完整的免疫功能性质。此外,这些DC分泌高水平促炎因子IL12,低水平免疫抑制因子IL10。免疫荧光试验显示,抗原长肽能有效地被imDC内化,主要定位于细胞质而非溶酶体。患者每次接受回输的CTL平均6.63 × 109,这些细胞几乎全是CD3+T细胞,大部分为CD8+T细胞,小部分为CD4+和CD3+CD56+(NKT)细胞,极少量的调节性T细胞(Treg)。此外CTL上清中检测到一定量的IFN-y和TNF-α,极少量免疫抑制因子IL10和IL4。产生于HLA-A2+患者的CTL对HepG2细胞(HLA-A2+)表现出更强的细胞杀伤活性相对于HuH-7细胞(HLA-A2-)。MASCT治疗后患者不良反应少,多次MASCT治疗后,患者外周血NKT细胞,CD56+NKG2D+细胞,和效应T细胞比例上调,Treg细胞比例持续下调。此外,T细胞特异性增殖及分泌IFN-γ的能力均显著提高,T细胞对HCC抗原肽库及多种抗原单肽产生了特异性免疫应答,且未复发患者PBMC的特异性免疫应答水平显著高于复发患者。2.MASCT治疗可以显著提高TACE的疗效,延长PFS和OS。联合治疗组和单纯TACE组中位PFS分别为9.5个月和5.5个月,差异有统计学意义(p=0.001);联合治疗组和单纯TACE组中位OS分别为19.5个月和10.5个月,两组对比有统计学差异(p=0.033)。是否接受MASCT治疗、治疗前AFP水平、门静脉侵犯、ECOG评分是影响HCC患者PFS的独立预后因素;而是否接受MASCT治疗、治疗前总胆红素水平、门静脉侵犯是影响OS的独立预后因素。研究结论:1.本研究表明MASCT技术可成功诱导培养mDC及CTL,并可改善HCC患者体内免疫抑制状态,诱导针对肿瘤抗原肽的特异性免疫应答,且.会随着治疗次数的增加而增强应答。2.MASCT治疗可以显著提高TACE的疗效,延长PFS和OS。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

【参考文献】