人髓样锌指结构1的表观调控及其与金属硫蛋白2A在抑制胃癌中的相互作用

发布时间：2018-12-21 08:09

【摘要】：背景与目的胃癌是我国最常见的高发肿瘤之—,鉴别能够用于早期诊断及化疗敏感与耐药的预后标志物具有重要的临床应用价值。金属硫蛋白2A (Metallothionein, MT2A)和NF-κBB均被认为是与肿瘤药物敏感性相关的分子,而且以NF-κB信号通路为靶标的治疗干预被认为是抑制肿瘤生长、改善肿瘤化疗耐药的有效举措。课题组前期研究表明,MT2A在胃癌细胞与组织中表达降低。大蒜衍生物己二烯三硫化物(Diallyl Trisulfide, DATS)及其联用化疗药多西他赛(Docetaxel, DOC)可通过表观遗传机制上调MT2A,增加IκB-α表达,抑制NF-κB活性,从而抑制胃癌细胞体内外增殖。这些结果提示,MT2A在胃癌中起到抑癌基因样作用,参与调控NF-κB信号通路,而且MT2A-NF-KB通路在肿瘤发生发展、检测癌症患者预后、增强肿瘤化疗耐药敏感性等方面具有重要作用。然而MT2A调控IKB-a具体机制尚不清楚。通过序列结构分析,发现IκB-α基因启动子区域有一锌指结构样基序(]motif),可能是锌指蛋白Kruppel家族成员,骨髓锌指1(Myeloid Zinc-Finger 1, MZF1)特异结合DNA并发挥转录调控的重要结构域。我们据此推测胃癌中MZF1可能作为一新的抑癌基因,与MT2A木目互作用,是MT2A调控IκB-α的一个重要分子靶点。本研究通过检测分析胃癌细胞和组织中的MZF1差异表达与表观调控,研究MZF1的生物学功能,探讨MZF1与MT2A的相互作用关系,以期阐明MT2A/MZF1-NF-kB通路在DATS和DOC抗胃癌效应中的分子作用基础,为胃癌患者的个体化精准诊疗提供有效的分子靶标。材料与方法采用RT-PCR、qPCR和Western Blot等检测分析胃癌组织细胞中MZF1的表达,以及过表达或干扰MT2A或MZF1后的MZF1与MT2A表达变化；通过甲基化特异性PCR、硫化测序及染色质免疫共沉淀-qPCR分析胃癌组织细胞中MZF1基因的DNA甲基化及组蛋白修饰状态；应用MTT检测、细胞迁移和侵袭等研究MZF1对胃癌细胞生长、迁移和侵袭的影响,探讨MZF1在胃癌中的生物学功能。借助免疫共沉淀、染色质免疫共沉淀及细胞免疫荧光等技术分析MT2A与MZF1的相互关系。结果1、在人胃癌细胞及组织中,MZF1普遍低表达或不表达,启动子区CpG岛呈现DNA高甲基化状态,并伴随着组蛋白乙酰化修饰降低；去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza)以及去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(Trichostation A, TS A)处理可逆转上调MZF1在胃癌细胞中的表达。2、在人胃癌细胞系BGC823中过表达MZF1,可导致细胞的增殖能力、侵袭和迁移能力较空载对照极显著降低(P0.01)；而在表达MZF1的人永生化胃细胞系GES-1中干扰MZF1表达后,可导致细胞的增殖、侵袭和迁移能力较空载对照显著增强(P0.05)。3、BGC823细胞过表达MT2A或经DATS和DOC诱导处理,均可检测出MZF1与MT2A的相互结合；共聚焦荧光显微镜观察显示两者共定位于细胞核中；染色质免疫共沉淀分析提示MZF1与MT2A蛋白均与IκB-α基因的启动子区结合。4、在BGC823细胞中,过表达MT2A, MZF1的表达上调；在过表达MT2A的BGC823细胞中干扰MT2A后,MZF1的表达降低；但在过表达MT2A的细胞中干扰MZF1,MT2A的表达未见明显变化。5、在BGC823, DATS和DOC可诱导MT2A和MZF1的表达；干扰MT2A, DATS和DOC对MZF1表达的诱导作用受到明显抑制。结论1、在胃癌细胞中,MZF1及MT2A呈现表观沉默现象并受其启动子区DNA甲基化及组蛋白乙酰化调控。2、MZF1抑制胃癌细胞的生长、迁移和侵袭。3、在胃癌细胞中,MZF1可与MT2A相互作用,并通过调控IκB-α的转录表达发挥抑癌基因样作用。4、MZF1的表达可能受到MT2A的调控。5、DATS及DOC可表观上调MZF1的表达,进而发挥其抗肿瘤作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：北京交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 ;第五届金属硫蛋白国际会议将于2004年10月10-13日在北京召开[J];中国生物化学与分子生物学报;2003年05期

2 雍政,何冰,郭军华;硒与金属硫蛋白的研究进展[J];解放军药学学报;2003年04期

3 ;第五届金属硫蛋白(Metallothionein,MT)国际会议将于2005年10月8～12日在北京召开。[J];药物生物技术;2005年03期

4 杨在昌;镉对小鼠肝肾中锌分布的影响——金属硫蛋白的作用[J];国外医学(卫生学分册);1979年05期

5 王国钦;胰脏的金属硫蛋白防止镉对胰岛素分泌的抑制[J];国外医学(卫生学分册);1979年05期

6 徐兆发;冯兆良;;镉金属硫蛋白[J];国外医学(卫生学分册);1983年02期

7 陈水锦;;大鼠各组织对金属诱导金属硫蛋白合成的反应[J];国外医学(卫生学分册);1983年02期

8 金泰异;任锡麟;;金属硫蛋白测定的进展[J];遵义医学院学报;1986年01期

9 胥宝会;诱导金属硫蛋白对放射线损伤的防护作用——使小鼠致死率下降[J];国外医学(卫生学分册);1987年05期

10 程时;;金属硫蛋白[J];生理科学进展;1987年04期

相关会议论文 前10条

1 雍政;何冰;徐卓立;郭军华;;硒诱导金属硫蛋白的分离、纯化与鉴定[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集（第一部分）[C];2002年

2 蒋与刚;郭长江;高兰兴;顾景范;;锌诱导金属硫蛋白合成及其对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用[A];中国营养学会第八次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2000年

3 郭军华;徐卓立;刘颖;贺卫W;茹炳根;;探索一种有机硒诱导的新型金属硫蛋白[A];海峡两岸三地药理学学术报告会论文汇编[C];2001年

4 何冰;雍政;徐卓立;郭军华;;利用蛋白质芯片质谱分离纯化金属硫蛋白[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集（第一部分）[C];2002年

5 刘林;王建秀;;金属硫蛋白与多肽相互作用的研究[A];中国化学会第26届学术年会分析化学分会场论文集[C];2008年

6 耿乃志;崔燕;;金属硫蛋白的研究进展[A];2009年全国基层优秀中医表彰大会暨全国第二次民间验方、诊疗技术学术研讨会会议论文集[C];2009年

7 刘树刚;孔祥英;;锌对幼鼠脑发育及金属硫蛋白表达影响的实验研究[A];四川省营养学会1997年学术会议暨妇幼营养保健学习班专题报告及论文摘要汇编[C];1997年

8 郝守进;茹炳根;;环境中铅的毒性及其解毒机理的研究[A];Risk Assessment of Toxic Chemicals--Proceedings of CCAST (World Laboratory) Workshop[C];2001年

9 应晨江;;金属硫蛋白促排铅作用及对微量元素的影响[A];中国营养学会第七届理事会青年工作委员会第三次学术会议暨微量营养素与慢性病青年学者高峰论坛论文集[C];2012年

10 张敬旭;符绍莲;;金属硫蛋白对铅致胚胎氧化损伤的保护作用[A];第六届全国优生科学大会论文汇编[C];2006年

相关重要报纸文章 前4条

1 罗梅;适量饮用茅台酒有益于健康与金属硫蛋白有关[N];贵州日报;2005年

2 孙英威 呼涛;我国成功获取金属硫蛋白[N];中国乡镇企业报;2003年

3 孙国根邋王春;应对镉接触者“易感”筛选[N];科技日报;2008年

4 三水;“五元一次方程”解读茅台[N];中华工商时报;2004年

相关博士学位论文 前10条

1 李景喜;海藻中类金属硫蛋白/多肽的检测分析及对金属诱导响应研究[D];中国海洋大学;2015年

2 陈伟强;心理应激条件下脑金属硫蛋白的表达及其调控机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

3 杨丽芳;金属硫蛋白的心肌保护机制研究[D];第四军医大学;2014年

4 陈亮;金属硫蛋白，金属硫蛋白抗体与镉致肾功能损伤[D];复旦大学;2006年

5 于立博;新疆鹰嘴豆中金属硫蛋白对铅毒性作用的干预研究[D];新疆医科大学;2013年

6 帅怡;金属硫蛋白抗阿霉素心脏毒性作用的基因组学与蛋白质组学研究[D];四川大学;2007年

7 常秀丽;应答蛋白基因表达在镉接触中作为生物标志物的研究[D];复旦大学;2005年

8 刘秋菊;金属硫蛋白拮抗血管紧张素Ⅱ/p53通路诱导的心肌细胞凋亡的体内体外研究[D];吉林大学;2010年

9 谢东扬;灵芝中一种DNase的特征和MT基因序列分析[D];福建农林大学;2007年

10 黄国健;金属硫蛋白与铜抗肿瘤作用相互关系的实验研究[D];中国协和医科大学;1997年

相关硕士学位论文 前10条

1 王洋;金属硫蛋白检测方法的研究[D];吉林大学;2010年

2 何冰;蛋白质表达指纹图谱研究硒代金属硫蛋白对放射肺损伤的防护作用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年

3 吴传松;类金属硫蛋白产生菌的分离培养及特性研究[D];华中科技大学;2009年

4 王同青;玉米金属硫蛋白的表达、纯化及其光谱学特性研究[D];太原理工大学;2016年

5 林舒晔;人髓样锌指结构1的表观调控及其与金属硫蛋白2A在抑制胃癌中的相互作用[D];北京交通大学;2016年

6 柳大军;融合表达人金属硫蛋白重组乳酸菌的构建及其预防慢性铅中毒的应用研究[D];暨南大学;2016年

7 邹海平;重金属对农田蚯蚓体内金属硫蛋白和相关酶活性的影响[D];湖南农业大学;2015年

8 苏郁洁;金属硫蛋白在原核生物中的表达及在环境治理中的应用[D];山东大学;2007年

9 王凯;蚯蚓金属硫蛋白的诱导、测定及硒对锑中毒的解毒机理[D];河北大学;2013年

10 艾丹丹;铜、锌、镉与金属硫蛋白的结合特性及其对植物中金属硫蛋白的胁迫效应研究[D];河北大学;2012年

，

本文编号：2388636