缬沙坦通过NOX2、NOX4途径减轻阿霉素心脏毒性作用的研究

发布时间：2018-12-29 10:16

【摘要】：目的:探讨缬沙坦通过NOX2、NOX4介导的对阿霉素诱导的大鼠心肌损伤预保护作用及其可能机制。方法:选择8周龄SPF级、雄性、Sprague-Dawley(SD)大鼠,每只体重(170±10)g,共40只,随机分为三组,适应性饲养一周后开始造模。模型组(n=18):使用0.9%氯化钠将阿霉素配制为2mg/ml溶液,按1.25ml/kg.Body Weight(BW),腹腔注射,每周1次,共6周,按照2ml/kg.BW使用0.9%氯化钠灌胃。缬沙坦干预组(n=14):在与模型组相同处理的同时给予缬沙坦干预,用0.9%氯化钠将缬沙坦配成10mg/ml溶液,按2ml/kg.BW给予灌胃,每天给药1次,连续6周;正常对照组(n=8)腹腔注射等量0.9%氯化钠,灌胃等量0.9%氯化钠。三组每周均根据体重调整药物剂量,其他饲喂条件相同,药物干预后观察至10周。随后,分别进行心脏超声;HE和Sirius red染色病理检查;运用ELISA法测定心肌组织中肾素(Renin)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、活性氧簇(ROS)、丙二醛含量(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)相关指标的蛋白表达水平;Western blot检测NOX2、NOX4的蛋白表达。结果:造模第10周,正常对照组、模型组、缬沙坦干预组的生存率分别为100(4)(8/8)、66.66(4)(12/18)和85.71(4)(12/14)。大鼠心脏超声检测显示模型组、缬沙坦干预组及正常对照组的左心室射血分数(LVEF)分别为(60.06±13.54)(4)、(75.31±10.39)(4)和(89.11±2.09)(4),模型组和缬沙坦干预组与正常对照组相比较LVEF显著降低;而缬沙坦干预组的LVEF值又显著高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。模型组、缬沙坦干预组及正常对照组的左心室收缩末径(LVESD)分别为(2.70±1.02)mm、(2.48±0.89)mm和(1.38±0.52)mm,与正常对照组相比,模型组和缬沙坦干预组的LVESD值均显著增大,差异有统计学意义(P0.05),而缬沙坦干预组与模型组的LVESD相比较有降低趋势,但无显著差异(P0.05)。模型组、缬沙坦干预组及正常对照组的左室短轴缩短率(LVFS)依次为(60.44±6.61)%、(30.84±10.68)%和(58.15±13.34)%,正常对照组的LVFS值明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05),缬沙坦干预组与对照组比较无明显差异(P0.05)。三组间比较左心室舒张末径(LVEDD)无显著性差异。病理:(1)HE染色:正常对照组可见心肌纤维排列有序,染色均匀,未见肿胀、断裂;模型组:心肌纤维排列紊乱、变细、溶解断裂,细胞间质水肿,心肌细胞空泡样变。缬沙坦干预组:心肌细胞排列较整齐,局部出现肌浆溶解,少部分细胞间质肿胀。(2)Sirius red染色:正常胶原纤维着色为红色,心肌纤维着色成黄色。正常对照组:心肌纤维排列整齐,心肌间质和血管周围有少量猩红色胶原纤维;模型组:心肌纤维结构排列紊乱,血管及心肌纤维间质周围分布大量红色胶原纤维;缬沙坦干预组:心肌纤维未见肿胀及断裂,可见散在猩红色心肌胶原纤维分布于血管周围。运用ELISA法测定心肌组织中肾素(Renin)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、活性氧簇(ROS)、丙二醛含量(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)相关指标的蛋白表达水平。正常组、模型组及缬沙坦干预组中的肾素含量(ng/ml)分别是(27.19±2.26)、(41.79±3.70)和(27.19±2.26),其中模型组的肾素含量明显高于对照组及缬沙坦干预组,差异有统计学意义(P0.05),同时缬沙坦干预组与对照组相比较肾素含量显著增高,差异有统计学意义(P0.05)。正常组、模型组及缬沙坦干预组中血管紧张素Ⅱ的含量(ng/ml)分别为(341.94±51.35)、(413.75±69.03)和(348.10±66.97);醛固酮的含量(ng/ml)分别为(246.50±68.02)、(376.75±85.27)及(264.23±71.03);活性氧簇的含量(ng/ml)分别为(275.35±71.82)、(355.58±100.13)及(327.38±69.79);丙二醛的含量(ng/ml)分别为(2.55±0.72)、(3.99±0.93)及(2.72±0.77),根据以上结果均显示正常对照组与模型组的上述4项指标相比较均显著减低(P0.05),而模型组与缬沙坦干预组及正常对照组相比较均显著增高(P0.05),正常对照组与缬沙坦干预组相比较差异无统计学意义(P0.05)。正常对照组、模型组、缬沙坦干预组的超氧化物歧化酶的含量(ng/ml)分别为(144.57±32.13)、(105.41±22.56)和(138.846±18.129),缬沙坦干预组中的超氧化物歧化酶含量明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05),而缬沙坦干预组中的超氧化物歧化酶含量与正常对照组相比较无明显差异(P0.05)。Western blot检测模型组、缬沙坦干预组及正常对照组中NOX2的蛋白表达量分别为(0.73±0.12)、(0.44±0.05)及(0.22±0.03);NOX4的蛋白表达量分别为(0.94±0.18)、(0.65±0.05)和(0.36±0.02)。Western blot检测NOX2及NOX4的结果显示模型组、缬沙坦干预组及正常对照组三组间两两比较均有显著性差异(P0.05),NOX2及NOX4的蛋白表达量在模型组、缬沙坦干预组及正常对照组中呈依次递减的趋势。通过对Western blot结果分析后提示运用缬沙坦的处理后能显著降低阿霉素诱导心肌病大鼠的心肌组织中NOX2及NOX4的蛋白表达。结论:本研究采用经典心肌病模型,以心肌毒性药物阿霉素诱导SD大鼠心肌病,不仅从大鼠一般状况、心脏超声表现和病理变化反映了所诱导的SD大鼠出现心肌病心衰损害特征,而且在阿霉素诱导大鼠心肌病的过程中,预防性给予缬沙坦干预,从上述三个方面,即一般状况、心脏超声和病理变化方面证实减轻阿霉素引起的心脏毒性,减轻了心脏的收缩功能损伤;提示缬沙坦可以预防性保护阿霉素心肌损伤;并进一步探讨其可能的机制,从蛋白表达水平证实缬沙坦通过NOX2、NOX4介导途径抑制阿霉素导致的过度氧化应激,从而实现对心肌的保护作用。
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【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R730.5

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