PTX敏感胃癌细胞在紫杉醇诱导衰老过程中Tristetraprolin表达机制的研究

发布时间：2019-01-07 09:33

【摘要】：背景:胃癌是我国最常见的消化系统恶性肿瘤,新辅助/辅助化疗是胃癌治疗的重要临床手段。然而化疗耐药也是临床工作中仍不能解决的棘手问题。化疗过程中过度产生的衰老相关分泌表型(Senescence-Associated Secretory Phenotypes,SASPs)被证明是导致化疗耐药的主要原因。Tristetraprolin(ZFP36,TTP,TIS11或称为Nup475)是一种新兴的抑癌蛋白,可通过与SASPs相关细胞因子的mRNA结合,并通过将mRNA运送到细胞P小体(P-Body),介导脱腺苷作用使这些mRNA降解,从而抑制SASPs过度分泌,增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。然而TTP在化疗诱导的细胞衰老过程中表达是否发生改变,及TTP表达改变的原因均不明确。同时也无相关文献报道TTP表达改变是否与对化疗药物的敏感性相关。因此,本实验拟研究TTP在紫杉醇相对敏感和相对耐药细胞株衰老模型中TTP表达改变情况,及其表达改变的具体分子机制,以便为提高新辅助/辅助化疗敏感性提供新的思路。方法:首先利用紫杉醇对NCL-N87、BGC-823、SGC-7901、HGC-27四种常见胃癌细胞进行初步筛选,鉴别出四株细胞中对紫杉醇相对敏感和相对耐药细胞株。然后使用紫杉醇分别刺激相对敏感和相对耐药胃癌细胞,构建两种胃癌细胞衰老模型,并使用衰老相关β-半乳糖苷酶染色验证衰老模型构建成功。随后利用Western-Blot观察在紫杉醇相对敏感和相对耐药细胞株衰老模型中TTP表达情况差异,并利用qRT-PCR和ELISA检测紫杉醇相对敏感细胞衰老前后IL-1a、IL-1β、IL-6和IL-8表达变化。接着使用IL-1a、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子对紫杉醇相对敏感胃癌细胞进行刺激,初步寻找出刺激TTP表达的关键细胞因子。之后利用干扰质粒转染,构建细胞因子干扰细胞衰老模型,并检测细胞因子干扰衰老模型中TTP表达水平,从而确定细胞因子在衰老过程中对TTP表达的刺激作用。最后通过使用NF-κB信号通路的阻断剂处理胃癌细胞,确定调节TTP表达的信号通路。结果:通过利用紫杉醇初步筛选,结果显示SGC-7901是对紫杉醇相对耐药的胃癌细胞株,而BGC-823是对紫杉醇相对敏感的胃癌细胞株。在相对敏感细胞和相对耐药细胞的衰老模型构建成功后,通过Western-Blot检测发现在紫杉醇诱导的BGC-823和SGC-7901细胞衰老模型中,TTP表达水平存在明显差异,BGC-823衰老模型中TTP表达明显高于SGC-7901。通过qRT-PCR和ELISA检测发现,BGC-823衰老后IL-1a、IL-1β、IL-6和IL-8表达明显较衰老前增高。通过利用IL-1a、IL-1β、IL-6、IL-8四种细胞因子刺激BGC-823细胞,结合IL-1β干扰质粒转染,构建IL-1β(-)细胞衰老模型,并检测IL-1β(-)细胞衰老模型中TTP表达变化;结果显示IL-1β是在紫杉醇诱导胃癌细胞衰老过程中TTP表达的主要刺激因子。最后通过使用NF-κB的阻断剂IKK-Inhibitor VII分别阻断NF-κB信号通路的经典途径和经典+非经典途径,并利用IL-1β刺激阻断后的细胞、检测其中TTP表达,证明了在紫杉醇诱导胃癌细胞衰老过程中,IL-1β可通过激活NF-κB经典和非经典信号通路刺激TTP表达。结论:首先本研究成功构建了紫杉醇诱导的胃癌细胞衰老模型。其次实验结果显示IL-1β是紫杉醇诱导细胞衰老过程中TTP表达的主要刺激因子。最后发现了在紫杉醇诱导胃癌细胞衰老过程中,IL-1β可通过激活NF-κB信号通路经典途径及非经典途径发挥刺激TTP表达的作用。
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【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2

【参考文献】