早期乳腺浸润性导管癌miR-10b的表达与临床病理因素、分子亚型及预后的初步研究

发布时间：2019-03-30 15:23

【摘要】：目的:miR-10b作为miRNA成员之一具有与乳腺癌复发及远处转移的相关性,早期乳腺浸润性导管癌作为乳腺腺癌类型之一具有同样特性,miR-10b在早期乳腺浸润性导管癌复发转移中可能起到主要作用。较高的稳定性是miR-10b作为一个良好的生物标志物的重要特征。经过数年保存的福尔马林固定石蜡包埋的标本中仍然可以有效的提取和定量。原位杂交技术具有费用低、操作简单、临床上具有可推广性,可以检测单个细胞的mi R-10b表达量,还可在不经分类和分离的情况下,比较不同细胞系中的miR-10b表达水平,本研采用原位杂交方法检测miR-10b表达情况。研究miR-10b在早期乳腺浸润性导管癌中表达差异及其与早期乳腺浸润性导管癌临床病理特征关系;miR-10b与早期浸润性导管癌的中位无瘤生存时间及其与早期乳腺浸润性导管癌预后之间的关系。对早期乳腺浸润性导管组织行免疫组化检测雌激素受体、孕激素受体、人类表皮生长因子受体-2后,根据第12届St Gallen国际乳腺癌会议共识将早期乳腺浸润性导管癌进行分型,研究早期乳腺浸润性导管癌中mi R-10b与ER-a、PR、HER-2之间的关系,miR-10b与早期乳腺浸润性导管癌的ER-a、PR、HER-2及分子亚型的中位无瘤生存时间及其与早期乳腺浸润性导管癌预后之间的关系。最后通过靶基因预测软件及文献报道筛选出miR-10b靶基因Notch基因1、核受体共阻遏物-2、HOXD10基因、核受体亚家族4组A3、cAMP反应元件结合蛋白1、过氧化物酶体增殖物激活型受体a、过氧化物酶体增殖物激活型受体β,经实时荧光定量PCR实验验证miR-10b与早期乳腺浸润性导管癌的复发转移是否相关。为进一步研究miR-10b基因在早期乳腺浸润性导管癌复发转移过程中的作用奠定基础。方法:首先采用原位分子杂交技术检测193例miR-10b在早期乳腺浸润性导管癌表达情况,通过临床资料将其193例石蜡标本分为淋巴结阴性124例和淋巴结阳性69例;用免疫组化进行检测早期浸润性导管癌中的雌激素受体、孕激素受体、人类表皮生长因子受体-2的表达量,对早期乳腺浸润性导管癌进行分子分型。最后将筛选出miR-10b靶基因Notch1、NCOR2、HOXD10、NR4A3、CREB1、PPARA、PPARGCB,经实时荧光定量PCR实验验证是否与早期乳腺浸润性导管癌复发转移相关。统计学方法采用Pearson卡方检验分析miR-10b表达与各临床指标之间差异性;采用Kaplan-Meier法计算累计无瘤生存时间;应用log-rank检验进行中位无瘤生存时间分析;采用cox进行多因素分析。采用配对t检验的方法比较早期乳腺浸润性导管癌的癌和癌旁组织中靶基因的表达。检验水准α=0.05。结果:在早期乳腺浸润性导管癌中mir-10b表达与淋巴结转移情况和有无肿瘤复发转移具有统计差异(p≤0.05);mir-10b表达阴性中位无瘤生存时间较mir-10b表达阳性时间长,两者具有统计差异(p≤0.05);淋巴结阴性时mir-10b阴性表达的中位无瘤生存时间较阳性表达长,两者具有统计差异(p≤0.05);mir-10b及内分泌治疗情况为早期乳腺浸润性导管癌独立预后因素(p≤0.05),mir-10b阳性表达为危险因素(or1),内分泌治疗为保护因素(or1)。mir-10b表达在淋巴结阳性中位无瘤生存时间无统计差异(p0.05);与月经状态,年龄,er-α、pr、her-2的表达无显著性差异(p0.05)。第二部分:在早期乳腺浸润性导管癌中mir-10b阳性表达率在不同er-α表达之间具有差异性(p≤0.05);在her-2(-)时mir-10b阳性表达率明显高于her-2(+),具有统计学差异(p≤0.05)。依据免疫组化及fish检测结果中er-α、pr、her-2的表达水平进行分型符合纳入为139例,在四种不同分子亚型中mir-10b阳性表达率存在差异,luminalb中mir-10b阳性表达率显著低于其他各组,具有统计学意义(p≤0.05);当er-α(+)、pr(+)、her-2(-)时,早期乳腺浸润性导管癌中位无瘤生存时间长,提示预后好,但中位无瘤生存分析显示,mir-10b阳性表达对er-α(+)、pr(+)、her-2(-)的早期乳腺浸润性导管癌中位无瘤生存时间无明显影响,差异具有统计学意义(p≤0.05);分子亚型中的中位无瘤生存时间显示,luminala型中位无瘤生存时间最长,luminalb型和basal-like型居中,her-2过表达型中位无瘤生存时间最短,差异具有统计学意义(p≤0.05);多因素分析分子亚型为早期乳腺浸润性导管癌预后独立影响因素(p≤0.05),mir-10b阳性表达是早期乳腺浸润性导管癌预后的危险因素(or1),但此结果经多因素分析无统计学意义(p0.05)。第三部分:通过靶基因预测软件和文献检索筛选出mir-10b靶基因notch1、ncor2、hoxd10、nr4a3、creb1、ppara、ppargcb,经实时荧光定量pcr实验验证,mir-10b实时荧光扩增曲线拐点清楚,各样本曲线平行性好,扩增效率相近,基线平直;扩增产物的熔解曲线均显示单峰,证明引物合理,无非特异性扩增。mir-10b靶基因中notch1、ncor2及hoxd10在癌组织中较癌旁组织低表达,具有统计学意义(p≤0.05)。而nr4a3、creb1和ppara在癌组织中较癌旁组织均上调,没有统计学意义(p0.05)。然而ppargcb在癌组织中较癌旁组织上调,具有统计学意义(p≤0.05)。结论:mir-10b表达水平与早期乳腺浸润性导管癌复发转移相关,特别在淋巴结阴性的早期乳腺浸润性导管癌中mir-10b阳性表达促进其复发转移,中位无瘤生存时间降低,mir-10b阳性表达可以作为早期乳腺浸润性导管癌的复发转移预后因素,是早期乳腺浸润性导管癌的预后指标。早期乳腺浸润性导管癌中mir-10b阳性表达与er-α、her-2呈具有相关性,在分子亚型之间表达存在明显差异,在Luminal B型中阳性表达率明显低于其他各型。ER-α(+)、PR(+)、HER-2(-)的中位无瘤生存时间长,提示预后较好,但miR-10b阳性表达对ER-α(+)、PR(+)、HER-2(-)早期乳腺浸润性导管癌预后无明显影响;分子亚型中Luminal A、B型中位无瘤生存时间长,HER-2过表达型和Basal-like型中位无瘤生存时间短,提示预后差。多因素分析分子亚型是早期乳腺浸润性导管癌预后独立因素。mi R-10b阳性表达负调控Notch1、NCOR2、HOXD10靶基因,导致早期乳腺浸润性导管癌复发转移。miR-10b将作为早期乳腺浸润性导管癌的预后参考指标。
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【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9

【参考文献】