TGF-β1经DNMT1调控肺腺癌A549细胞对顺铂敏感性的初步研究

发布时间：2019-04-08 17:32

【摘要】：目的：转化生长因子-β1 (transforming growth factor-beta 1, TGF-β1)与肿瘤的发生、发展以及凋亡关系密切,DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases, DNMTs)在肿瘤发生及耐药中发挥重要作用,并伴随SPARC(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)的表达下调。因此,本研究拟通过外源性TGF-β1及其受体阻断剂作用肺腺癌细胞,以探究TGF-β1经DNMT1调控肺腺癌A549细胞对顺铂化疗敏感性的改变,进一步阐述非小细胞肺癌对顺铂的耐受机制,为阐明肺腺癌对顺铂耐受的机制奠定基础,为肺癌化疗药物的研发提供新的靶点。方法：以对顺铂耐受的肺腺癌A549细胞(DDP-A549)为研究对象,通过外源TGF-β1作用DDP-A549细胞,观察DDP-A549细胞增殖能力和对顺铂敏感性的变化；并利用RT-PCR(?)Western blot检测在TGF-p1作用下DNMTs和SPARC mRNA水平和蛋白水平的变化。以对顺铂敏感的肺腺癌A549为研究对象,通过TGF-β1受体阻断剂SB431542(10μM)作用A549细胞,观察A549细胞增殖能力和对顺铂敏感性的变化。并利用RT-PCR和Western blot检测在SB431542作用下DNMTs和SPARC mRNA水平和蛋白水平的变化。结果：5 ng/mL、10 ng/mL TGF-β1作用后的DDP-A549细胞对顺铂的ICso均显著低于空白对照组[(22.28±1.60)μmol/L vs (39.05±5.40) μmol/L, P0.05; (25.5±3.83)μmol/L vs(39.05±5.40)μmol/L,P0.01]; 5ng/mL、10 ng/mL TGF-β1作用后DDP-A549细胞在5 μmol/L顺铂环境中,其克隆数显著低于空白对照组[(752.7±190.4)vs(1218±139.5), P 0.01; (650.3±144.7)vs(1218vs139.5),P0.01)]; 15μmol/L顺铂作用24h时,5ng/mL、10 ng/mL TGF-β1组细胞凋亡分数均显著高于空白对照组[(42.01±3.24)% vs(35.5±1.94)%, P 0.05; (43.76±1.54)% vs (35.5±1.94)%, P0.05)]。5 ng/mL、10 ng/mL TGF-β1作用24 h后,DDP-A549细胞DNMT1 mRNA水平和蛋白水平的表达均显著下调,SPARC mRNA水平和蛋白水平的表达均显著上调。10μMSB431542作用A549细胞24 h后,A549细胞对顺铂的IC5α显著高于空白对照组[(31.40±0.17) μmol/L vs (26.14±1.74)μmol/L, P 0.05]; 10μMSB431542作用后的A549细胞在0.5μmol/L顺铂环境中,其克隆数和空白对照组之间无显著差异[(405.7±18.15) vs (423.7±24.58), P 0.05]; 10 μmol /L顺铂作用24 h后,10μMSB431542组和空白对照组之间的细胞凋亡分数无显著差异[(16.60±3.22)%vs(16.58±2.00)%, P0.05)]。10μMSB431542作用A549细胞24 h后,细胞DNMT1在mRNA水平上无显著变化,在蛋白水平的表达显著上调。SPARC在mRNA水平和蛋白水平的表达却无显著变化。5 ng/mL TGF-β1单独或者联合10μMSB431542作用A549细胞24h后,5ng/mL TGF-β1组A549细胞对顺铂的IC5α显著低于空白对照组和联合作用组[(15.18±1.46)vs (26.14±1.74)μmol/L, P 0.01; (15.18±1.46)μmol/L vs(24.20±1.78)μmol/L, P0.05]; 5ng/mL TGF-β1作用后的A549细胞在0.5μmol/L顺铂环境中,其克隆数显著低于空白对照组和联合作用组[(173.7±50.34) vs (423.7±24.58), P 0.05; (173.7±50.34)vs(491.0±25.94), P0.01]; 10 μmol/L顺铂作用24 h时,5 ng/mL TGF-β1组细胞凋亡分数显著高于空白对照合和联合作用组[(27.32±1.94)% vs (16.58±2.00)%, P 0.05;(27.32±1.94)% vs (19.66±3.43)%, P0.05]。5 ng/mL TGF-β1单独或者联合10μM SB431542作用A549细胞24 h后,5ng/mL TGF-β1组A549细胞DNMT1在mRNA水平和蛋白水平的表达显著低于空白对照组和联合作用组,SPARC在nRNA水平和蛋白水平的表达显著上调高于空白对照组和联合作用组。结论：TGF-β1能够增强肺腺癌A549细胞对顺铂的敏感性,TGF-B1→DNMT1→SPARC可能是TGF-β1调控肺腺癌对顺铂敏感性的通路之一,这有望为研究肺癌对顺铂化疗耐受提供新的思路,有助于进一步阐明肺癌对顺铂耐受的分子机制。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

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本文编号：2454773