慢病毒介导的CIB1过表达对人脑胶质瘤细胞增殖和周期影响

发布时间：2019-04-14 18:03

【摘要】：目的神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤,其中恶性度最高的多形性胶质母细胞瘤现有的手术及放化疗等治疗方式对患者总体生存率无显著改善。本研究观察重组慢病毒中与肿瘤增殖、周期相关的钙整合素结合蛋白1(calcium-and integrin-binding protein 1,CIB1)基因,在人胶质瘤细胞系U251中的过表达情况及对其增殖和周期的影响。方法 PCR扩增CIB1目的片段,构建CIB1重组pLVX-IRES-CIB1-tdTomato慢病毒载体,将重组慢病毒表达载体感染293T包装细胞,进行病毒的包装并检测病毒滴度,筛选最佳病毒感染复数并感染U251胶质瘤细胞,荧光显微镜观察pLVX-IRES-CIB1-tdTomato慢病毒表达,CCK-8法检测CIB1过表达对人胶质瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪检测CIB1过表达对细胞周期的影响。结果成功构建慢病毒表达载体pLVX-CIB1-IRES-tdTomato,制备了重组CIB1慢病毒和空载体慢病毒,病毒滴度分别为2.9×10~7和2.8×10~7 ifu/mL;用最佳病毒感染复数100感染U251细胞。CCK-8检测显示,CIB1感染组与空载体对照组及空白组相比明显促进细胞增殖(P0.05),提示CIB1过表达对人脑胶质瘤细胞U251有生长促进效应。流式细胞检测显示,CIB1感染组U251细胞G_2/M期细胞百分比明显增加,S期细胞比例下降。结论 CIB1过表达可以促进U251细胞增殖,并使细胞G_2/M细胞比例上升。
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【作者单位】： 兰州军区兰州总医院实验中心·甘肃省干细胞与基因药物重点实验室;兰州大学药学院;兰州军区兰州总医院神经外科;
【基金】：国家自然科学基金(81372177)
【分类号】：R739.41
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本文编号：2458001