Testin基因在非小细胞肺癌中抑癌机制的研究

发布时间：2019-04-18 23:17

【摘要】：目的:1.检测Testin基因在非小细胞肺癌组织及癌旁正常组织的表达情况。2.检测Testin基因在非小细胞肺癌细胞系及人支气管上皮细胞系的表达情况。3.研究Testin基因在非小细胞肺癌组织中的表达与各临床病理参数之间的关系。4.通过构建针对Testin基因的过表达载体,利用慢病毒转染技术将Testin过表达载体转染不同的肺癌细胞构建稳定Testin基因过表达肺癌细胞株,进而通过细胞实验研究Testin基因对肺癌细胞增殖、侵袭、克隆、凋亡、转移等恶性生物学行的影响。方法:1.检测Testin基因在非小细胞肺癌组织及癌旁正常组织中的表达:收集并保存非小细胞肺癌患者(N=30)的非小细胞肺癌组织及对照的癌旁正常组织,用半定量PCR、western blot和免疫组化检测Testin在非小细胞肺癌组织中的表达;分析Testin基因表达与非小细胞肺癌患者临床病理的关系,为临床诊断、治疗提供理论基础。2.检测Testin基因在非小细胞肺癌细胞系(A549、LTEP-a-2、NCI-H1650)及人支气管上皮细胞16HBE中表达差异,培养非小细胞肺癌细胞系,用半定量PCR、Western blot检测Testin基因在非小细胞肺癌细胞系中的表达;3.Testin基因功能的初步研究:构建Testin真核慢病毒表达载体,转染到体外培养的人非小细胞肺癌细胞系(A549、NCI-H1650)细胞中,通过嘌呤霉素筛选出稳定表达克隆,以未转染组和转染空病毒组作对照,RT-PCR及Western b1ot检测Testin在细胞内的表达情况。利用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞克隆形成实验、MTT试剂盒检测细胞增殖、Transwell法检测细胞侵袭。分析Testin对于肺癌细胞恶性生物学功能的影响。结果:利用RT-PCR结果提示,发现Testin在肺癌细胞株LTEP-a-2,NCI-H1650,A549中的表达水平均低于16HBE,差异有显著性(P0.01)。对比癌旁正常组织,70%(21/30)的肺癌组织中Testin mRNA表达水平明显下调,有显著差异(P=0.000)。Western blotting检测结果提示66%(20/30)的肺癌组织中Testin蛋白表达降低(P=0.000)。免疫组化结果提示与癌旁正常组织对比,Testin在肺癌组织中表达显著下降(P0.05)。Testin基因表达在患者的年龄、性别、肿瘤大小、吸烟、病理类型等分组中均无相关性(P0.05)。Testin基因表达与肺癌的分化程度、淋巴结转移及临床分期相关,(r=0.546,r=0.602,r=0.520,P0.05)。分期越晚、分化程度越低、淋巴结有转移,Testin表达量越少。高分化、中分化、低分化三者之间有显著性差异(P0.05)。构建Testin过表达慢病毒表达载体,分别在肺癌细胞系A549、NCI-H1650中转染Testin基因过表达慢病毒载体,经RT-PCR及Western blotting检测证实转染成功并筛选出稳定过表达Testin基因的肺癌细胞系,且过表达细胞株生长状态表现好。MTT结果显示在Testin表达量较少的A549及NCI-H1650肺癌细胞株中过表达Testin可导致肺癌细胞的增殖能力减弱(P0.05)。细胞克隆形成试验显示过表达Testin基因可导致细胞克隆形成能力减弱(P0.05)。Transwell试验结果显示过表达Testin基因可降低肺癌细胞侵袭性(P0.01)。流式细胞术检测凋亡试验显示过表达Testin基因可显著促进细胞凋亡(P0.01)。结论:Testin在非小细胞肺癌中的表达量显著下降,而且与分化程度、淋巴结转移及临床分期存在相关性。在体外实验中利用成功转染了Testin过表达载体的肺癌细胞证明了Testin基因可以作为抑癌基因可以抑制肺癌细胞的增殖、侵袭、克隆形成等肿瘤恶性生物学行为,并促进肺癌细胞凋亡。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

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本文编号：2460378