青蒿素逆转口腔鳞癌Tca8113细胞耐药的相关性研究

发布时间：2019-04-22 08:41

【摘要】：目的:通过体外加药诱导的方法建立耐化疗药物卡铂(Ka)的人口腔鳞癌Tca8113细胞模型,观察耐卡铂(Ka)的人口腔鳞癌Tca8113细胞的耐药相关基因P-gp、GST-π的表达变化,再用中药青蒿素干预耐卡铂(Ka)的口腔鳞癌Tca8113细胞,对比前后耐药基因P-gp、GST-π的变化,以及相应蛋白表达的变化,从而探讨青蒿素逆转口腔鳞癌Tca8113细胞耐药的相关性研究。方法:1、体外诱导人口腔鳞癌Tca8113细胞耐药细胞株的建立。本次实验采用的化疗药物为卡铂(Ka),诱导方法采用小剂量长期间暴露法逐渐增加药物的浓度。2、采用细胞免疫化学的方法检测耐药细胞株中耐药相关基因P-gp、GST-π的表达变化。3、体外培养耐卡铂(Ka)的Tca8113细胞,用不同浓度(0μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)的青蒿素作用于耐药细胞(24、48、72小时)后,用CCK8法检测各组中青蒿素对耐药细胞增殖活性的影响;用RT-PCR技术检测不同浓度青蒿素(0μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)作用于耐药细胞中P-gp、GST-π在mRNA表达水平上的变化;用Western-blot技术检测不同浓度青蒿素(0μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)作用于耐药细胞P-gp、GST-π在蛋白表达水平上的变化。结果:1、细胞免疫化学结果显示,P-gp和GST-π在耐卡铂(Ka)的Tca8113细胞的阳性表达率远高于Tca8113细胞,可以认为耐卡铂(Ka)的Tca8113细胞和Tca8113细胞相比,P-gp和GST-π的表达均升高(P=0.018,P=0.020,P0.05)。2、CCK8细胞增殖实验结果显示,青蒿素能够抑制耐卡铂(Ka)的Tca8113细胞的增殖,不同浓度的青蒿素干预组与不加药物的对照组相比,差异均有统计学意义(P=0.000,P0.05);随着青蒿素浓度的增加,细胞增殖抑制率也在增加,在青蒿素浓度为100μg/ml时抑制率达到最大值;同一青蒿素浓度作用下,随着时间的增加,抑制率也在增加,在作用72小时时抑制率达到最大值(P=0.000,P0.05)。3、RT-PCR结果显示,与耐药组相比,加入青蒿素的逆转组细胞P-gp和GST-π的mRNA表达水平均有下降(P0.05),二者的mRNA表达量随着青蒿素浓度的不断增加而逐渐减少,不同浓度的青蒿素逆转组与不加药物的耐药组相比,差异均有统计学意义(P-gp基因F=5.670,P=0.000;GST-π基因F=2.108,P=0.000)。4、Western-blot结果显示,与耐药组相比,加入青蒿素的逆转组细胞P-gp和GST-π的蛋白表达水平均有下降(P0.05),二者的蛋白表达量随着青蒿素浓度的不断增加而逐渐减少,不同浓度的青蒿素逆转组与不加药物的耐药组相比,差异均有统计学意义(P-gp基因F=206.661,P=0.000;GST-π基因F=153.016,P=0.000)。结论:1、青蒿素对耐卡铂(Ka)的人口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖有抑制作用,其抑制率随青蒿素浓度的增高而增高。2、青蒿素作用下,耐卡铂(Ka)的人口腔鳞癌Tca8113细胞中P-gp和GST-π的表达降低,从而逆转了耐药细胞的耐药性。3、青蒿素逆转耐卡铂(Ka)的人口腔鳞癌Tca8113细胞多药耐药,在人口腔鳞癌的治疗方面可能具有潜在的临床研究价值,可能对口腔鳞癌新型抗癌药物及辅助化疗药物的种类开拓新的领域。
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【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.8

【参考文献】