RUNX3逆转食管鳞状细胞癌对顺铂耐药机制的研究

发布时间：2019-04-28 08:52

【摘要】：目的本研究拟检测RUNX3在食管癌患者肿瘤组织及相应细胞系中的发达,并探讨其与患者临床病例参数的相关性,同时分析RUNX3和Aktl表达的变化对顺铂作用后的食管癌细胞生物学行为的影响,探究RUNX3逆转食管癌细胞顺铂耐药的相关机制,旨在为食管癌的临床诊断以及靶向治疗提供可靠依据。方法(1)采集103例2009年1月～2012年1月期间就诊于山东大学附属医院胸外科行食管鳞状细胞癌(Ⅱa-Ⅲb期)切除手术患者癌组织及相应癌旁正常组织,荧光定量PCR检测RUNX3 mRNA表达,免疫组化法检测RUNX3和Aktl蛋白的表达,分析RUNX3与患者化疗耐药和临床病例资料的相关性,分析RUNX3与Aktl的相关性。(2)构建携带有RUNX3全基因或siAktl'慢病毒载体,包装出病毒后感染ESCC细胞系,荧光定量PCR和western blot检测RUNX3的表达：CCK-8实验检测细胞增殖活性；流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期：Hoechst染色实验检测细胞凋亡率；western blot检测Akt1、p-Akt1、Bcl-2、Bcl-x1、 CyclinD1、P21、Bax蛋白的表达。(3)将ESCC细胞中表达RUNX3及相应对照组细胞经皮下注射裸鼠.随后经腹膜内注射顺铂,比较各组小鼠的肿瘤大小抑制肿瘤抑制率：结果(1)一般资料分析结果表明,男性患者与女性患者相比,RUNX3的低表达率差异无统计学意义(P0.05)；在小于56岁的食管鳞状细胞癌患者中,RUNX3的低表达率与大于56岁患者相比差异无统计学意义(P0.05)：在肿瘤浸润程度为T1-T2期的患者当中,RUNX3呈低表达的患者比例明显低于T3、T4期患者(P0.05)；在临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者当中,RUNX3呈低表达的患者比例明显低于Ⅲ~Ⅳ期患者(P0.05)；在有淋巴结转移的患者当中,RUNX3呈低表达的患者比例明显高于无淋巴结转移的患者(P0.05)。在化疗敏感的食管鳞状细胞癌患者癌组织中RUNX3 mRNA及相应蛋白的表达水平明显高于化疗不敏感者(P0.05),在未接受转助化疗的患者其癌组织中RUNX3 mRNA及相应蛋白的表达水平明显高于术前接受过辅助化疗者(P0.05)。在RUNX3表达呈阳性的组织中,Aktl的表达量明显降低(P0.05)；在RUNX3表达为阴性的组织甲.Aktl的表达量则明显增高(P0.05); RUNX3和Aktl表达呈负相关(r=-0.296,p=0.00420.01)。(2)顺铂耐药的Eca109和TE-1细胞中RUNX3 mRNA和蛋白的表达水平明显低于非耐药Eca109和TE-1细胞(P0.01)。Eca-109 PR R3和Eca-109 PR R3细胞中RUNX3 mRNA和蛋白的表达水平均明显高于Eca-109 PR vector和TE-1 PR vector细胞(P0.01)。随着顺铂浓度的增大,Eca-109 PR vector组和Eca-109 PR R3组、TE-1 PR vector组和TE-1 PR R3组的细胞活性均逐渐降低,呈剂量依赖性,其中当顺铂浓度为100μg/mL时细胞活性最低；Eca-109 PR R3组和TE-1 PR R3组细胞各浓度时的活性明显低于TE-1 PR vector组和TE-1 PR vector组(P0.05)。随着顺铂作用时间的延长,Eca-109 PR vector组和Eca-109 PR R3组、TE-1 PR vector组和TE-1 PR R3组细胞的活性均逐渐增高,呈时间依赖性,其中当顺铂作用后96 h时细胞活性最高：Eca-109 PR R3组各顺铂作用时间点的细胞活性明显低于Eca-109 PR vector组(P0.05)。随着顺铂作用时间的延长,Eca-109 PR R3组和TE-1 PR R3组组细胞的活性均逐渐增高,呈时间依赖性,其中当顺铂作用后96 h时细胞活性最高；Eca-109 PR R3组和TE-1 PR R3组各顺铂作用时间点的细胞活性明显低于TE-1 PR vector组和TE-1 PR vector (P0.05)。Eca-109 PR R3组和TE-1 PR R3组细胞的IC50浓度明显低于Eca-109 PR vector组和TE-1 PR vector组(P0.05)。Eca-109 PR R3组和TE-1 PR R3细胞凋亡数量明显高于Eca-109 PR vector组和TE-1 PR vector组(P0.01)。Eca-109 PR R3组和TE-1 PR R3组细胞G1期细胞数量明显高于Eca-109 PR vector组和TE-1 PR vector组(P0.01),G2/M期细胞数量明显少于Eca-109 PR vector组和TE-1 PR vector组(P0.05)。随着顺铂浓度的增大,Eca-109 PR vector组和Eca-109 PR siAktl组、TE-1 PR vector组和TF-1 PR siAkt1组的细胞活性均逐渐降低,呈剂量依赖性,其中当顺铂浓度为10μg/mL对细胞活性最低；Eca-109 PR siAkt1组和TE-1 PR siAkt1组各浓度的细胞活性明显低于Eca-109 PR vector和TE-1 PR vector (P0.05)。Eca-109 PR siAktl组和TE-1 PR siAktl组细胞的IC50浓度明显低于Eca-109 PR vector组和TE-1 PR vector组(P0.05) Eca-109 PR siAkt1组和TE-1PR siAktl组细胞凋亡数量明显高于Eca-109 PR vector组和TE-1 PR vector组(P0.01)。Eca-109 PR siAktl组和TE-1 PR siAktl组细胞G1期细胞数量明显高于Eca-109 PR vector组和TE-1 PR vector组(P0.01),G2/M期细胞数量明显少于Eca-109 PR vector组和TE-1 PR vector组(P0.05)。Eca-109 PR R3和Eca-109 PR siAkt1组细胞中Akt1、 Bcl-2、Bcl-xl、CyclinDl蛋白的表达水平明显低于Eca-109 PR vector和TE-1 PR vector组(P0.05)；而Eca-109 PR R3和Eca-109 PR siAktl组细胞中RUNX3、P21、Bax蛋白的表达水平则明显高于Eca-109 PR vector和TE-1 PR vector组(P0.05)。(3) Eca-109 PR vector组和Eca-109 PR R3组裸鼠均成瘤,成瘤率为100%。在治疗期间各组裸鼠肿瘤体积均随着时间推移不新增大,但Eca-109 PRR3组裸鼠在第18天后各测量时间点的肿瘤体积均明显小于Eca-109 PR vector组(P0.05)。随着时间推移,各组裸鼠肿瘤体积抑制率均逐渐增高,但Eca-109 PR R3组裸鼠在各测量时间点的肿瘤体积抑制率均明显大于Eca-109 PR vector组(P0.05)。结论RUNX3在食管鳞状细胞癌中的表达量降低可能是导致发生顺铂耐药的原因之一,RUNX3能够通过抑制Akt信号通路逆转食管鳞状细胞癌顺铂耐药。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1

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本文编号：2467501