胃癌中microRNA-195靶基因的确定及与化疗增敏、临床预后相关性的研究

发布时间：2019-05-07 08:07

【摘要】：[目的]在我国,胃癌的死亡率较高,大约每小时会有20人因患胃癌去世远高于全球的平均水平。早期胃癌不易被诊断,导致了胃癌的死亡率较高,同时在治疗方面进展期胃癌也尚未发现十分有效的治疗手段。因此进一步探索胃癌的发生发展机制,通过实验创建有理论基础的、全新的诊治途径是十分必要的。近些年来被发现的MicroRNA (miRNA),也被称为微小RNA,属于非编码RNA分子中全新的一种。就当前的研究观点来看,MicroRNA对肿瘤的发生以及发展产生调控作用是通过近于癌基因或抑癌基因等途径进行的。研究者们的关注焦点正越来越集中在与肿瘤发生发展相关的miRNA分子上。本课题组在前期芯片分析筛选研究中发现在胃癌中有一个明显下调的miR-195分子,既往研究显示miRNA-195在肝癌、结直肠癌和非小细胞肺癌等肿瘤中发挥着非常重要的作用。提示miR-195很有可能通过调控靶基因来对肿瘤增殖通路进行抑制或对凋亡通路进行激活,进而影响胃癌患者的疗效和预后。本课题拟从胃癌中miR-195和靶基因的确定、对胃癌细胞增殖凋亡等细胞表型的影响、与化疗药物的疗效和临床预后的相关性分析等四个方面去探讨miR-195与胃癌的规律性关系；为胃癌预后分层和临床治疗寻找新的靶点提供理论依据。[方法]对转染后microRNA-195表达不同的细胞进行RNA提取并逆转录,利用Real-time PCR方法进一步验证胃癌中microRNA-195的表达情况；靶基因预测软件预测microRNA-195的靶基因,并通过双荧光素及突变实验、Western Blot以及Real-time PCR等方法进行验证；对细胞进行转染,通过流式细胞术对细胞凋亡作用进行分析,通过划痕实验及Transwell实验对其侵袭及迁移作用做出分析；利用顺铂处理细胞,比较microRNA-195的不同表达对细胞增敏的影响；对29例患者的临床资料进行统计,分析microRNA-195表达改变对患者肿瘤的TNM分期、Borrmann分型、血管侵袭以及生存期的影响。[结果]明确验证了microRNA-195在胃癌中的表达呈现明显下调趋势；确认了Akt3是microRNA-195的靶基因,在microRNA-195过表达的细胞中表达明显降低细胞实验表明,转染后microRNA-195过表达的细胞的侵袭能力显著下降,早期凋亡增加；microRNA-195的高表达对顺铂化疗疗效具有明显增敏作用；PFS与OS在microRNA-195上调患者中明显延长,其结果具有统计学意义(P0.05)。[结论]microRNA-195在胃癌患者中呈明显下调趋势,microRNA-195的过表达可通过调控靶基因Akt3表现出明显的抑癌作用；microRNA-195的表达水平与胃癌患者的疗效和预后明确相关。
[Abstract]:[objective] in China, the mortality rate of gastric cancer is high. About 20 people die of gastric cancer per hour, which is much higher than the global average. Early gastric cancer is not easy to be diagnosed, leading to a high mortality of gastric cancer, and the treatment of advanced gastric cancer has not found a very effective treatment. Therefore, it is necessary to explore the mechanism of carcinogenesis and development of gastric cancer and establish a new way of diagnosis and treatment through experiments. In recent years, MicroRNA (miRNA), also known as tiny RNA, is a novel non-coding RNA molecule. From the point of view of current research, the regulation of MicroRNA on the development and development of tumor is carried out by near-oncogenes or tumor suppressor genes. Researchers are increasingly focusing on miRNA molecules associated with tumorigenesis and progression. Previous studies have shown that miRNA-195 plays a very important role in hepatocellular carcinoma, colorectal cancer and non-small cell lung cancer. In previous studies, we found that there is a significant down-regulation of miR-195 molecule in gastric cancer. It is suggested that miR-195 may inhibit tumor proliferation pathway or activate apoptosis pathway by regulating target genes, which may affect the curative effect and prognosis of patients with gastric cancer. The purpose of this study is to explore the regular relationship between miR-195 and gastric cancer from four aspects: the determination of miR-195 and target genes, the effect on proliferation and apoptosis of gastric cancer cells, the correlation analysis between miR-195 and the curative effect of chemotherapeutic drugs and the clinical prognosis. It provides theoretical basis for finding new targets for prognosis stratification and clinical treatment of gastric cancer. [methods] RNA was extracted from the transfected cells with different expression of microRNA-195 and reverse transcription was performed. The expression of microRNA-195 in gastric cancer was further verified by Real-time PCR method. The target gene prediction software was used to predict the target gene of microRNA-195, which was verified by difluorescein and mutation test, Western Blot and Real-time PCR. The effect of cell apoptosis was analyzed by flow cytometry, and the invasion and migration of cells were analyzed by scratch test and Transwell test. The effects of different expression of microRNA-195 on cell sensitization were compared with cisplatin treatment. The clinical data of 29 patients were analyzed, and the effects of microRNA-195 expression on TNM stage, Borrmann classification, vascular invasion and survival were analyzed. [results] the expression of microRNA-195 was clearly down-regulated in gastric cancer. It was confirmed that Akt3 was the target gene of microRNA-195, and the expression of microRNA-195 decreased significantly in the cells overexpressed by microRNA-195. The results showed that the invasive ability of the cells overexpressed by microRNA-195 decreased significantly after transfection, and the early apoptosis increased. The high expression of microRNA-195 significantly increased the chemosensitivity of cisplatin, and PFS and OS were significantly prolonged in the patients with up-regulation of microRNA-195, the results were statistically significant (P0.05). [conclusion] microRNA-195 is obviously down-regulated in patients with gastric cancer, the overexpression of microRNA-195 can inhibit cancer by regulating the target gene Akt3, and the expression level of microRNA-195 is closely related to the curative effect and prognosis of patients with gastric cancer.
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

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本文编号：2470905