CXCR3在结直肠癌中的表达及功能研究

发布时间：2019-06-21 11:56

【摘要】：目的 探讨趋化因子CXCR3变体(CXCR3-A和CXCR3-B)的表达及其在结直肠癌中的功能。明确其在结直肠癌发生、发展中的调节方式,为寻找新的靶点奠定基础。方法 利用免疫组织化学法(IHC-P)、蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测CXCR3-A和CXCR3-B在结直肠癌组织及细胞中的表达。利用CCK-8(Cell Counting Kit 8)、Transwell实验、划痕实验分析CXCR3-A和CXCR3-B干预后细胞的增殖、浸润及迁移能力,利用裸鼠皮下成瘤实验分析CXCR3-A、CXCR3-B对结肠癌细胞成瘤能力的影响,并利用免疫组织化学法检测成瘤后组织中Ki67的表达。结果1.免疫组织化学实验检测50个CRC样本(同时取该标本的≥5cm的癌旁组织),结果显示,癌组织中CXCR3-A的表达明显高于癌旁组织(P0.001),而CXCR3-B的表达水平在癌旁组织中显著高于癌组织(P0.001)。临床病理因素分析发现,CXCR3-A、CXCR3-B均与结直肠癌分化、分期和转移存在一定的关系(P0.001),而与患者肿瘤部位等无关(P0.05),同时,CXCR3-A随着TNM分期的变化表达增强,而CXCR3-B降低。2.Western-blot实验显示NCM460(正常肠上皮细胞)、HCT116(原位结肠癌细胞)、LS174T(原位结肠癌细胞)、SW480(原位结肠癌细胞)、SW620(结肠癌淋巴结转移细胞)、LOVO细胞系中CXCR3-A在结肠癌淋巴结转移细胞SW620(P0.001)、LOVO(P0.001)中的表达高于原位结肠癌细胞HCT116(P0.01)、LS174T(P0.01)、SW480(P0.01)和正常肠上皮细胞NCM460。而CXCR3-B在正常结肠上皮细胞中表达较癌及转移癌细胞中高,差异有统计学意义。3.CCK-8增殖实验显示过表达CXCR3-A促进HCT116和LOVO细胞增殖,当细胞生长到第二天时开始显示差异(P0.05),最明显的差异出现在第三天(P0.001)。过表达CXCR3-B显著抑制了HCT116和LOVO细胞的生长。此外,CXCR3-A和CXCR3-B对NCM460细胞增殖没有显著影响。CXCR3-A和CXCR3-B对细胞增殖显示出相反的作用。4.Transwell侵袭实验表明,过表达CXCR3-A能显著促进HCT116(P0.01)和LOVO(P0.001)细胞侵袭。过表达CXCR3-B对HCT116和LOVO细胞侵袭具有抑制作用,但抑制不明显。5.划痕实验显示过表达CXCR3-A促进了HCT116(P0.001)和LOVO(P0.001)细胞的迁移,CXCR3-A和CXCR3-B之间的比较在NCM460(P0.001),HCT116(P0.001)和LOVO(P0.001)细胞中具有显著性差异。Transwell迁移实验与划痕实验结果一致。6.皮下成瘤实验显示,过表达CXCR3-A组肿瘤较对照组增大(P0.01),而过表达CXCR3-B组肿瘤较对照组减小(P0.01)。检测过表达CXCR3-A肿瘤组发现Ki67增殖能力高于对照组(P0.001),而过表达CXCR3-B肿瘤组发现Ki67增殖能力低于对照组(P0.001),表明CXCR3-A、CXCR3-B对肿瘤的增殖作用不同。7.过表达CXCR3-A竞争性的下调CXCR3-B的表达,过表达CXCR3-B竞争性的下调CXCR3-A的表达。在NCM460细胞系中过表达CXCR3-A后,我们检测到CXCR3-B下调,差异有统计学意义(P0.001)。而在HCT116(P0.001)和LOVO(P0.01)细胞系中过表达CXCR3-B后,我们检测到CXCR3-A下调。结论趋化因子受体3(CXCR3)在结直肠癌(CRC)进展的不同分期中发挥的作用不同。CXCR3-A与CXCR3-B在结直肠癌中可能以一种竞争性的拮抗机制相互作用,在调节结直肠癌的进程中,CXCR3-A/CXCR3-B的平衡失调可能引起了CRC的增殖、浸润和迁移。
[Abstract]:Objective To study the expression of CXCR3 (CXCR3-A and CXCR3-B) and its function in colorectal cancer. It is clear that its regulation in the occurrence and development of colorectal cancer will lay the foundation for finding a new target point. Methods The expression of CXCR3-A and CXCR3-B in colorectal cancer tissues and cells was detected by immunocytochemical method (IHC-P) and Western-blot. The proliferation, infiltration and migration of CXCR3-A and CXCR3-B were analyzed by using CCK-8 (Cell Counter Kit 8), Transwell's experiment and scratch test. The effects of CXCR3-A and CXCR3-B on the tumor-forming ability of colon cancer cells were analyzed by subcutaneous tumor-forming in nude mice, and the expression of Ki67 in the post-tumor tissues was detected by immunohistochemical method. Results 1. The results showed that the expression of CXCR3-A in the cancer tissues was significantly higher than that in the adjacent tissues (P 0.001), while the expression level of the CXCR3-B was significantly higher in the adjacent tissues than in the adjacent tissues (P 0.001). The clinical and pathological factors showed that the CXCR3-A and CXCR3-B had a certain relationship with the differentiation, staging and metastasis of colorectal cancer (P0.001), but not related to the tumor site of the patient (P0.05), while the expression of CXCR3-A was enhanced with the change of TNM stage. And the CXCR3-B decreased.2. Western-blot analysis showed that the CXCR3-A in the lymph node metastasis of the colon cancer was SW620 (P.001) in the lymph node of the colon cancer by the NCM460 (normal intestinal epithelial cell), the HCT116 (in situ colon cancer cell), the LS174T (in situ colon cancer cell), the SW480 (in situ colon cancer cell), the SW620 (colon cancer lymph node metastasis cell), and the LOVO cell line. The expression of LOVO (P0.01) was higher than that of in situ colon cancer cell HCT116 (P0.01), LS174T (P0.01), SW480 (P0.01) and normal intestinal epithelial cell NCM460. 3. The expression of CXCR3-A on the proliferation of HCT116 and LOVO cells in the normal colonic epithelial cells was statistically significant.3. The expression of CXCR3-A in the proliferation of HCT116 and LOVO cells was shown by the proliferation of CCK-8, and the difference was observed when the cells were grown to the next day (P0.05), and the most significant difference occurred on the third day (P0.001). Overexpression of CXCR3-B significantly inhibited the growth of the HCT116 and LOVO cells. In addition, CXCR3-A and CXCR3-B have no significant effect on the proliferation of NCM460 cells. The effects of CXCR3-A and CXCR3-B on cell proliferation showed that the overexpression of CXCR3-A significantly promoted the invasion of HCT116 (P0.01) and LOVO (P0.001) cells. Overexpression of CXCR3-B has an inhibitory effect on the invasion of HCT116 and LOVO cells, but the inhibition is not obvious. The results showed that the expression of CXCR3-A promoted the migration of HCT116 (P0.01) and LOVO (P0.001) cells, and the comparison between CXCR3-A and CXCR3-B was significantly different in the cells of NCM460 (P0.001), HCT116 (P0.001) and LOVO (P0.001). The Transwell migration experiment was consistent with the results of the scratch test. The results showed that the expression of CXCR3-A group was higher than that in the control group (P0.01), while the tumor of the overexpressing CXCR3-B group was decreased in the control group (P0.01). The results showed that the proliferation of Ki67 was higher than that in the control group (P 0.001), and the expression of the CXCR3-B tumor group was lower than that of the control group (P 0.001), indicating that the proliferation of the tumor was different from that of the CXCR3-A and the CXCR3-B. The expression of CXCR3-B was down-regulated by overexpressing the CXCR3-A, and the expression of the CXCR3-A was down-regulated by the expression of the CXCR3-B. After the CXCR3-A was overexpressed in the NCM460 cell line, we detected that the CXCR3-B was down-regulated and the difference was statistically significant (P0.001). When the CXCR3-B was overexpressed in the HCT116 (P0.01) and LOVO (P0.01) cell lines, we detected that the CXCR3-A was down-regulated. Conclusion The role of chemokine receptor 3 (CXCR3) in different stages of colorectal cancer (CRC) progression is different. CXCR3-A and CXCR3-B may interact with a competitive antagonism in colorectal cancer, and in the process of regulating colorectal cancer, the balance of the CXCR3-A/ CXCR3-B may cause the proliferation, infiltration, and migration of CRC.
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.34

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本文编号：2504057