TAT-N15在溃疡性结肠炎及炎症相关性结直肠肿瘤中的治疗作用及机制研究
发布时间：2019-07-24 09:23
【摘要】：目的：证明DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型构建成功,同时证明PIK3R3在溃疡性结肠炎中发挥重要功能。方法：通过DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎模型,检测临床指标、病理改变及炎症细胞的浸润情况,同时检测PIK3R3在模型中的表达水平。运用免疫组化的方法检测溃疡性结肠炎临床标本中PIK3R3的表达情况。结果：DSS诱导的模型小鼠体重下降,结肠缩短；结肠上皮结构破坏,炎症细胞浸润增多；PIK3R3在DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠及溃疡性结肠炎临床组织标本中呈现高表达。结论：DSS诱导的溃疡性结肠炎模型构建成功。PIK3R3在DSS诱导的溃疡性结肠炎模型及临床标本中表达水平升高,PIK3R3在溃疡性结肠炎发病中发挥重要功能。目的：通过DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型,评估TAT-N15在溃疡性结肠炎中的治疗作用,并与阴性对照(对照多肽)及阳性对照(泼尼松龙)做对比。方法：检测各组小鼠体重情况,结肠长度,疾病活动指数；HE染色评估各组的病理改变并定量评分；免疫组化Ki-67染色评估上皮细胞的损伤情况；运用real-time PCR、 ELISA及流式CBA法评估相关细胞因子的表达。结果：TAT-N 15能抑制模型中小鼠体重的下降,降低疾病活动指数,缓解小鼠结肠长度的缩短;同时能改善病理变化和炎症细胞的浸润;降低Ki-67指数：减少促炎细胞因子的产生。结论：TAT-N 15能有效的降低疾病的临床指标,改善疾病的病理变化,促进炎症的尽快恢复,减少促炎细胞因子的表达。目的：证明TAT-N15能有效的抑制溃疡性结肠炎向炎症相关性结直肠肿瘤的恶性转化。方法：通过构建AOM/DSS诱导的炎症相关性结直肠肿瘤模型,给予TAT-N15药物治疗,观察癌前病变,最终生成肿瘤情况(个数、大小、分布及负荷等),临床指标(溃疡性结肠炎的发病率,疾病活动指数,结肠长度),病理改变,肿瘤的增殖和凋亡(Ki-67及TUNEL),以及细胞因子的表达。结果：TAT-N15能有效抑制癌前病变,肉眼可见肿瘤减少,HE染色显示癌前病变减少；最终形成的肿瘤评估发现TAT-N15组肿瘤数量更少,体积更小,荷瘤量更低；临床指标中：溃疡性结肠炎发病率更低,疾病活动指数更低,结肠长度更长；病理改变更轻；肿瘤的增殖更低,凋亡指数更高；促炎细胞因子表达更低,抑炎细胞因子表达升高。结论：TAT-N15能有效的抑制肿瘤的癌前病变,抑制最终炎症相关性肿瘤的生成。目的：验证在动物模型中TAT-N15能有效的抑制NF-κB信号通路；观察TAT-N15对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响及对Treg细胞表达的影响。方法：构建AOM/DSS诱导的动物模型,验证TAT-N15对p-NF-κB p65表达的影响；体外LoVo细胞中证明TAT-N15对p-NF-κB p65的影响；检测动物实验中TAT-N15对ZO-1表达的影响,体外细胞实验中过表达及低表达PIK3R3检测ZO-1的表达变化,LPS诱导的结肠渗透模型中检测TAT-N15对结肠渗透能力的影响；动物模型中,流式细胞学及免疫组化染色检测TAT-N15对Treg细胞比例的影响。结果：在AOM/DSS诱导的动物模型中,TAT-N15能有效的抑制p-NF-κB p65蛋白及p-STAT3蛋白水平,增加了ZO-1蛋白的表达,同时可升高Treg细胞的比例；细胞实验中,TAT-N15对p-NF-κB p65的表达水平存在时间及剂量依赖关系,能有效抑制p-NF-κB p65表达,对PIK3R3本身表达无影响；LPS诱导的渗透试验中,TAT-N15能降低肠道的渗透能力。结论：TAT-N15通过抑制NF-κB通路抑制炎症,同时增加肠道紧密连接蛋白的表达,增加Treg细胞的比例保护肠道的免疫功能。
【图文】：
ＰＩＫ３Ｒ３同样含有ｉ－ＳＨ２结构域，可与ｐｌｌＯ形成异源二聚体，参与ＡＫＴ的活逡逑化，发挥经典的ＰＩ３Ｋ的功能。与其他调节亚基相比较，ＰＩＫ３Ｒ３在其Ｎ末端含有２４逡逑个氨基酸组成的结构域（Ｎ２４），这是与其他调节亚基的唯一区别（图１）。我们实验逡逑室利用分子生物学技术将ＨＩＶ病毒的ｔａｔ蛋白与Ｎ２４重组体外合成融合多肤逡逑ＴＡＴ－Ｎ２４。ＴＡＴ－Ｎ２４能特异性的阻断ＰＩＫ３Ｒ３的Ｎ２４结构域与其他分子的结合，成为逡逑ＰＩＫ３Ｒ３特异性的抑制}3＂１。在ＴＡＴ－Ｎ２４的基础上，，我们保留了邋Ｎ２４发挥功能的粉。逡逑结构，去除９个无关氨基酸，形成ＴＡＴ－Ｎ１５。与ＴＡＴ－Ｎ２４相比，ＴＡＴ－Ｎ１５有更高的稳逡逑定性和更好的溶解性，同时不影响其功能。逡逑？逦ｉ邋ｐｓ。逡逑的４力口５巧化与其他调节３＾＾｜＾＾５！｜－区巧逡逑图１邋ＰＩＫ３Ｒ３与其他调节亚基的结构区别逡逑我们实验室在前期的工作中，针对ＰＩＫ３Ｒ３在肿瘤的发生发展、侵袭转移、耐药逡逑及血管生成等方面进行了深入的研究［＂－２２］。在炎症的研究中，我们发现ＰＩＫ３Ｒ３通过逡逑ＡＫＴ非依赖途径影响ＮＦ－ｋＢ信号通路ｐ６５的x锼峄佣俳傺紫赴蜃拥谋泶镥义希校场玻矗薄８菸颐乔捌诘奶逋庀赴笛榈慕峁
本文编号：2518546
【图文】：
ＰＩＫ３Ｒ３同样含有ｉ－ＳＨ２结构域，可与ｐｌｌＯ形成异源二聚体，参与ＡＫＴ的活逡逑化，发挥经典的ＰＩ３Ｋ的功能。与其他调节亚基相比较，ＰＩＫ３Ｒ３在其Ｎ末端含有２４逡逑个氨基酸组成的结构域（Ｎ２４），这是与其他调节亚基的唯一区别（图１）。我们实验逡逑室利用分子生物学技术将ＨＩＶ病毒的ｔａｔ蛋白与Ｎ２４重组体外合成融合多肤逡逑ＴＡＴ－Ｎ２４。ＴＡＴ－Ｎ２４能特异性的阻断ＰＩＫ３Ｒ３的Ｎ２４结构域与其他分子的结合，成为逡逑ＰＩＫ３Ｒ３特异性的抑制}3＂１。在ＴＡＴ－Ｎ２４的基础上，，我们保留了邋Ｎ２４发挥功能的粉。逡逑结构，去除９个无关氨基酸，形成ＴＡＴ－Ｎ１５。与ＴＡＴ－Ｎ２４相比，ＴＡＴ－Ｎ１５有更高的稳逡逑定性和更好的溶解性，同时不影响其功能。逡逑？逦ｉ邋ｐｓ。逡逑的４力口５巧化与其他调节３＾＾｜＾＾５！｜－区巧逡逑图１邋ＰＩＫ３Ｒ３与其他调节亚基的结构区别逡逑我们实验室在前期的工作中，针对ＰＩＫ３Ｒ３在肿瘤的发生发展、侵袭转移、耐药逡逑及血管生成等方面进行了深入的研究［＂－２２］。在炎症的研究中，我们发现ＰＩＫ３Ｒ３通过逡逑ＡＫＴ非依赖途径影响ＮＦ－ｋＢ信号通路ｐ６５的x锼峄佣俳傺紫赴蜃拥谋泶镥义希校场玻矗薄８菸颐乔捌诘奶逋庀赴笛榈慕峁
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