双打击淋巴瘤的临床病理特征及其预后分析

发布时间：2019-08-03 15:15

【摘要】：背景与目的根据WHO(2008)分类中的定义,将同时具有Myc和Bcl-2或Bcl-6基因易位的B细胞淋巴瘤称为双打击淋巴瘤(Double Hit lymphoma,DHL),并且将同时具有三者基因易位的称为三重打击淋巴瘤(Triple-hit lymphoma,THL)。另一种B细胞淋巴瘤通过免疫组织化学方法检测出同时具有MYC和BCL-2或BCL-6蛋白高表达,这类淋巴瘤称为双表达淋巴瘤(Double-expression lymphoma,DEL)。近年来,很多研究找寻MYC和BCL-2/BCL-6阳性表达的免疫组织化学最佳判断阈值,通过免疫组织化学蛋白表达筛选基因易位,以确定在日常实践中有风险的患者需通过FISH检测。本研究通过FISH及IHC方法检测实验组中DLBCL(Diffuse large B cell lymphoma)的Myc、Bcl-2、Bcl-6易位情况及相应蛋白的表达情况,得出双打击淋巴瘤与双表达淋巴瘤的临床及病理特征,探讨两者的联系并探讨其预后特征及诊治方案。方法1.收集资料:收集郑州大学第一附属医院2010年至2015年确诊为DLBCL患者的石蜡包埋组织标本,经本科室两位资深淋巴瘤医师重新阅片诊断,并筛选出应用CHOP方案或者R-CHOP方案的患者65例,组织微阵列技术(tissuemicroarray TMA)将65例标本制成组织芯片。2.整理资料:对筛选出来的65例DLBLC患者的临床资料和病理资料进行回顾性分析,并且对患者进行电话随访。3.免疫荧光原位杂交:使用Vysis LSI MYC双色,断裂重排探针,Vysis LSI BCL6双色,断裂重排探针和Vysis LSI IGH/BCL2双重融合易位探针(Abbott Molecular,Abbott Park,IL)。使用配备有DP72照相机和DP2-BSW软件(Olympus,Tokyo,Japan)的荧光显微镜(Olympus BX51,Tokyo,Japan)分析FISH信号。4.免疫组织化学:检测MYC、BCL-2、BCL-6、CD10、MUM-1、Ki-67蛋白的表达情况。5.统计分析:使用SPSS 17.0统计软件统计分析。Pearson卡方检验,连续性校正和Spearman秩相关分析用于确定变量之间的关联和相关性。使用Kaplan-Meier曲线绘制生存分析并使用对数秩检验进行比较。通过Cox比例风险回归模型分析单变量和多变量生存分析。当双侧P0.05时,结果被认为具有统计学意义。结果1.临床资料及随访:65例患者,其中男34例,女31例,男女性别之比为1.1:1,年龄4-81岁,平均年龄50.8岁,中位年龄为60岁。此组患者的Ann Arbor分期为:I期21例,Ⅱ期29例,Ⅲ期10例,Ⅳ期5例。根据上述相关指标计算患者的IPI评分,其中低危者32例,低/中危者18例,中/高危者10例,高危者5例。36例患者应用CHOP方案(环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松),29例患者使用利妥昔单抗的R-CHOP方案,随访2至80个月,生存34例,死亡31例。2.FISH结果:在所检测的65例DLBLC中Myc基因易位病例(14/65)占DLBCL的21.5%;Bcl-2基因易位病例占18.5%(12/65);Bcl-6基因易位占27.7%(18/65);BCL-2/IGH基因易位病例占18.5%(12/65)。7例(10.8%)肿瘤样品中Myc基因重排是唯一的易位。检测出6例DHL。其中4例(6.1%)具有Myc和Bcl-2基因易位,2例(3.1%)Myc和Bcl-6基因易位。9例(13.8%)Bcl-2和Bcl-6的同时易位。1例(1.5%)中检测到Myc、Bcl-2,Bcl-6基因的三重易位。3.免疫组化结果:65例DLBCL中GCB病例16例,NON-GCB病例46例;在Myc基因易位病例中GCB占27.6%(3/16),NON-GCB占68.8%(11/16);在Bcl-2/Ig H基因易位病例中GCB占26.3%(6/12),NON-GCB占41.7%(5/12),在Bcl-6基因易位病例中GCB占33.3%(4/120,NON-GCB占58.3%(7/12)。6例DHL患者中GCB占16.7%(1/6),NON-GCB占83.3%(5/6)。一例THL为NON-GCB。在所检测的65例DLBCL中MYC蛋白,BCL-2蛋白,BCL-6蛋白的表达情况。显示33例(50.1%)MYC蛋白高表达,32例(49.2%)显示BCL-2蛋白高表达,18例(27.7%)显示BCL-6蛋白高表达。我们使用ROC曲线分析来确定百分比的最佳截止值的蛋白阳性细胞。MYC,BCL-2和BCL-6的最佳临界值为≥50%,≥60%(等于预定阈值)和≥20%。Myc易位阳性病例(14例)中13例患者具有MYC蛋白高表达,特异性为90%。Bcl-2易位阳性病例(12例)有7例患者具有BCL-2蛋白高表达,特异性为58%。Bcl-2易位阳性病例(18例)有11例患者具有BCL-62蛋白高表达,特异性为61%。4.预后分析:6位DHL患者中的3例使用R-CHOP方案治疗,3例使用CHOP方案治疗,两组之间生存率并没有特异性。6例DHL患者全部死亡,生存期2-19个月,预后极差。1例THL生存8个月。与MYC易位相反,BCL-2或BCL-6基因的断裂并不能预测患者的OS和PFS。在CHOP和R-CHOP队列中分别评估了候选的预后因素。生存曲线显示MYC蛋白高表达在CHOP和R-CHOP组中与劣质OS显着相关。在CHOP队列中,BCL-2高蛋白表达与不良OS显着单独相关,但是不在R-CHOP队列中。然而,BCL-6蛋白高表达在R-CHOP队列中是不良预后因素,但是不在CHOP队列中。接下来我们分析DHS和THS对两个治疗组中的DLBCL患者的预后影响。在单变量分析中,在CHOP和R-CHOP组中,MYC/BCL-2蛋白高表达,MYC/BCL-6蛋白高表达和MYC,BCL-2和BCL-6三高蛋白表达都与不良OS相关。在R-CHOP队列中,当共表达MYC蛋白时,BCL-2高蛋白表达仅与较差的OS相关。BCL-2/BCL-6高表达显示有限的预后影响。在CHOP队列中,并入IPI,免疫组织化学分组(GCB对NON-GCB),MYC,BCL-2和BCL-6蛋白的多变量Cox回归模型显示IPI,高MYC蛋白表达和高BCL2蛋白表达,MYC/BCL-2高蛋白表达,MYC/BCL-6高蛋白表达,BCL-2/BCL-6高蛋白表达和三高蛋白表达独立影响OS的预后值。在R-CHOP队列中,并入IPI,MYC,BCL-2和BCL-6蛋白的多变量Cox回归模型显示:高MYC蛋白表达,高MYC/BCL-2 DHS,高MYC/BCL6 DHS和高THS对于不良OS和PFS具有独立的预后价值。高BCL2/BCL6 DHS同样也是独立的预后值。两组治疗方案患者的Cox模型显示,MYC高蛋白表达显示与Myc基因断裂没有相关性,BCL-6高蛋白表达显示与Bcl-6断裂没有相关性,BCL-2高蛋白表达显示与IGH/Bcl-2融合没有相关性。并入变量Myc断裂与DHS的Cox模型显示,IHC组或FISH组模型中的队列可以代表整个DHL患者人群并没有统计学意义。结论1.DHL与DEL患者具有高LDH水平,临床分期多为Ⅲ-Ⅳ期,多个结外部位的侵及,和高IPI评分的临床病理特征。2.对于MYC,BCL-2和BCL-6蛋白表达,具有50%,60%和20%的最佳Cut-Off值预测了通过FISH在DLBCL中检测到的Myc断裂,最终我们检测到的Myc断裂存在高特异性(90%),但是IGH/Bcl-2融合和Bcl-6断裂的并未发现高特异性。3.DHL患者的CHOP与R-CHOP方案并不能有效改善患者预后。
【图文】：

图 14.3 荧光原位杂交信号判读(参照产品说明书)阳性结果判读：Myc基因与Bcl-6基因分离：易位阳性的每个细胞出现两个分离的红色和绿色信号或者一个分离信号，一个正常红/绿融合信号，也可出现为以红色或绿色占优势的非配对的易位信号。IGH/Bcl-2基因融合：正常显示分开的2对红绿信号，易位阳性出现1-2个红/绿融合信号伴随或不伴随一对分开的红绿信号。分离及融合阳性都是在油镜下计数200个细胞核，以超过20%的肿瘤细胞核出现分离或融合信号视为基因易位阳性。5 随访以电话形式进行随访，起始时间为病理确诊时间，随访止于2016年1月1日，随访时间为2-80个月。记录患者至随访终点的生存状态，若患者死亡，则记录其死亡时间，计算所有患者的生存时间。

临床资料及随访：本研究中65例患者，男34例，女31例，比例为1.1:1，龄4～81岁，平均年龄50.8岁，中位年龄为60岁。根据AnnArbor分期标准：I期者21例，Ⅱ期患者29例，Ⅲ期患者10例，Ⅳ患者期5例。患者IPI评分结果显示低危者32例，低／中危者18例，中／高危者10例，高危者5例。36例患者应用CHO方案，，29例患者加用利妥昔单抗的R-CHOP方案，65例患者，随访至2016年1月日，随访2至80个月，生存34例，死亡31例。2 Fish 结果14 例（21.5％）发现了 Myc 基因的重排，18 例（28.7％）发现了 Bcl-6 因的重排，12 例（18.5％）发现了 Bcl-2 基因的重排（图 2）。7 例（10.8％）瘤样品中的 MYC 基因重排是唯一的易位。65 例 DLBCL 中 4 例（6.1％）具Myc 和 Bcl-2 基因易位，2 例（3.1％）Myc 和 Bcl-6 基因易位，9 例（13.8％Bcl-2 和 Bcl-6 基因的同时易位。故确诊 DHL 患者为 6 例。1 例（1.5％）中检到 Myc、Bcl-2，Bcl-6 基因的三重易位，为 THL。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.1

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本文编号：2522635