单羧酸转运蛋白1增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸的敏感性

发布时间：2019-09-05 19:06

【摘要】：目的探究单羧酸转运蛋白1(MCT1)在增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸(3-Br PA)敏感性中的作用,为乳腺癌治疗提供新思路。方法 MTT法检测3-Br PA对乳腺癌细胞的增殖抑制作用,溴化丙啶单染法流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA试剂盒检测细胞内己糖激酶Ⅱ、乳酸脱氢酶、乳酸、三磷酸腺苷水平,Western blot检测MCT1蛋白的表达,瞬时转染c DNA上调MCT1的表达后,检测3-Br PA对MDA-MB-231细胞的增殖和三磷酸腺苷水平的影响。结果 3-Br PA对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响不明显,200μmol/L作用24 h后增殖抑制率和凋亡率仅为8.72%和7.8%;但200μmol/L 3-Br PA作用MCF-7细胞24 h后其增殖抑制率和凋亡率为84.6%和82.3%。MDA-MB-231细胞的MCT1过表达后,200μmol/L 3-Br PA对细胞的增殖抑制率为72.44%,明显高于对照组(P0.05);25、50、100、200μmol/L 3-Br PA作用细胞6 h后,细胞内三磷酸腺苷水平和对照组相比分别为96.98%、88.44%、43.3%、27.56%。结论 MCT1能增强乳腺癌细胞对3-Br PA的敏感性,其机制可能是将3-Br PA转运到细胞内,从而抑制细胞糖酵解来发挥抗肿瘤作用。
【图文】：

MCF-7细胞

学差异（P<0.05，图1A）。在倒置显微镜同一视野下观察不同浓度3-BrPA处理后的细胞形态，结果显示：随着药物浓度的增加，MDA-MB-231细胞的形态和密度未见明显改变；而MCF-7细胞的形态和密度有明显改变（图1B）。20μmMDA-MB-231MCF-7025501002003-BrPA(μmol/L)B025501002003-BrPA(μmol/L)025501002003-BrPA(μmol/L)Clelivbailtiy%()120100806040200MDA-MB-23124h48h72h24h48h72hMCF-7Clelivbailtiy%()120100806040200******A图13-BrPA对MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖抑制作用Fig.1Inhibitoryeffectof3-BrPAonMDA-MB-231andMCF-7cells.A:Cellviability;B:Morphologicalchangesofthecells(*P<0.05vscontrol).2.23-BrPA诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7凋亡的作用流式细胞术检测结果显示，3-BrPA对MDA-MB-231细胞的凋亡未有明显影响，200μmol/L的3-BrPA作用于细胞后，凋亡率仅为7.8%，3-BrPA能显著诱导MCF-7细胞的凋亡，200μmol/L的3-BrPA作用于细胞后，其凋亡率为82.3%（图2）。2.33-BrPA对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的糖酵解酶活性的影响ELISA结果显示，与对照组比，随着药物浓度的增加，，MDA-MB-231细胞内己糖激酶Ⅱ和乳酸脱氢酶的活性未出现显著下降，差异不具有统计学意义（P>0.05）；而MCF-7细胞内的己糖激酶Ⅱ和乳酸脱氢酶活性在100、200μmol/L时均有明显下降，差异具有统计学意义（P<0.05，图3）。2.43-BrPA对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中乳酸和ATP水平的影响ELISA试剂盒检测表明，MDA-MB-231细胞内乳酸和ATP水平随着3-BrPA浓度的增加并未出现明显降低，与对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）；而MCF-7细胞?

MCF-7细胞,凋亡

通过Westernblot法检测发现，MCT1在MDA-MB-231细胞中几乎不表达，而在MCF-7细胞中表达较高（图5A）。为了证实MCT1对3-BrPA敏感性的影响，将MCT1cDNA转染到MDA-MB-231细胞中（图5B），并检测3-BrPA对过表达MCT1的MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用和ATP水平的影响。结果表明（图5C、D），3-BrPA对于过表达MCT1的MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用，同时也能显著降低细胞内的ATP025501002003-BrPA(μmol/L)MDA-MB-231MCF-7图23-BrPA对MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡的影响Fig.2Effectof3-BrPAonapoptosisofMDA-MB-231andMCF-7cells.120100806040200HexokinaseI(%)MDA-MB-231MCF-7025501002003-BrPA(μmol/L)025501002003-BrPA(μmol/L)*****MDA-MB-231MCF-7120100806040200Lactatedehydrogenase(%)图33-BrPA对MDA-MB-231和MCF-7细胞的糖酵解酶活性的影响Fig.3Effectof3-BrPAonglycolysisenzymeactivityinMDA-MB-231andMCF-7cells.A:HexokinaseⅡactivity;B:Lactatedehydrogenaseactivity(*P<0.05vscontrolgroup).AB120100806040200Contentoflacticacid(%)MDA-MB-231MCF-7025501002003-BrPA(μmol/L)025501002003-BrPA(μmol/L)****MDA-MB-231MCF-7120100806040200ATPlevel(%)AB图43-BrPA影响MDA-MB-231和MCF-7细胞的乳酸和ATP含量Fig.43-BrPAaffectstheleveloflacticacid(A)andATP(B)inMDA-MB-231andMCF-7cells.*P<0.05vscontrol.http://www.j-smu.comJSouthMedUniv,2017,37(5):588-593·591·
【作者单位】：蚌埠医学院药学院;蚌埠医学院第一附属医院消化科;
【基金】：国家自然科学基金(81372899,81603155) 安徽省教育厅重大项目(KJ2016SD39) 安徽省国际合作交流项目(1503062024) 安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2015A177) 蚌埠医学院研究生科研创新计划项目(Byycxz1621)~~
【分类号】：R737.9

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