高表达KRT8促进胃癌转移和影响患者预后

发布时间：2019-09-17 13:15

【摘要】：目的:细胞角蛋白(Keratin,KRT),是广泛存在于上皮细胞中间丝中的结构蛋白,参与固定、维护细胞及细胞核形态,分为多种型别。本研究检测分析KRT8在胃癌组织、癌旁组织及5种胃癌细胞株中的表达差异,探讨其对胃癌生物学表型的影响及在胃癌发展过程中的作用机制。方法:1.运用公共数据库预测KRT8在胃肿瘤患者中的表达量,采用qRT-PCR分别检测50例胃癌及其癌旁组织中KRT8的mRNA水平的表达丰度。2.收集70例胃癌组织标本,运用免疫组织化学染色技术检测KRT8蛋白在其中的表达差异,找出KRT8的表达与胃癌临床病理因素及预后关系。3.应用Western blot技术分析5种胃癌细胞系中KRT8的蛋白表达差异。采用基因过表达和基因干扰技术分别过表达和沉默KRT8并验证其效率。通过Tanswell迁移实验分别评估胃癌细胞在过表达组、沉默组中迁移能力的变化。4.采用Western blot检测细胞迁移、EMT相关蛋白变化及TGF-β通路的变化。结果:1.QRT-PCR结果显示相对于正常组织中KRT8的mRNA表达量在胃癌组织中表达增高(68%,34/50),与肿瘤公共数据库预测结果一致。2.免疫组化结果显示KRT8的胃癌组织中的表达与肿瘤的侵袭深度(p=0.002)和临床分期(p=0.025)相关,与年龄、性别、瘤体直径、分化程度无关。3.生存曲线分析结果揭示KRT8表达与胃癌患者的预后关联,Cox’s比例风险模型结果说明胃癌患者中高表达KRT8是其差预后的诊断指标。4.胃癌细胞系AGS中沉默KRT8的表达,能显著抑制细胞迁移和EMT的产生;在细胞系HGC-27中过表达KRT8促进细胞迁移和EMT的发生。5.KRT8可能通过TGFβ/smad信号通路调节胃癌细胞的EMT和转移。结论:KRT8在胃癌进展过程中具有重要意义,可能通过诱导胃癌细胞发生EMT而促进胃癌的转移,有望成为胃癌转移以及患者预后评价的一个新的分子标志。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.2

【参考文献】