miR-223靶向作用ECT2调控骨肉瘤细胞的生长和对骨肉瘤患者预后的影响研究

发布时间：2019-10-06 16:20

【摘要】：第一部分人骨肉瘤组织中Micro RNA-223的异常表达和上皮细胞转化序列2(ECT2)的变化及其临床价值目的:深入探讨人骨肉瘤组织micro RNA-223和上皮细胞转化序列2(ECT2)的表达及其临床价值。方法:临床上收集新疆自治区人民医院与安徽医科大学68例人骨肉瘤标本,用RT-PCR的方法检测68例骨肉瘤标本中病灶组织(即肿瘤组织)中miRNA-223的浓度变化、肿瘤周边组织miRNA-223的浓度表达、非患病组织(即正常组织)中miRNA-223的浓度表达;用免疫组织化学的方法与RT-PCR两种试验方法分别进行检测68例骨肉瘤标本中正常组织中ECT2的浓度变化、肿瘤周围组织中浓度变化、骨肉瘤组织中ECT2的浓度变化。结果:miRNA-223在68例骨肉瘤组织标本中的表达较正常组织显著减低,肿瘤边缘组织中的表达介于两者之间,有统计学意义(P0.05)。ECT2在68例骨肉瘤组织细胞中的浓度变化,由低到高成递增表现的排列顺序是同一患者来源的正常组织中浓度明显低于肿瘤周边组织中的表达显著低于骨肉瘤组织中的浓度变化,有统计学意义(P0.05)。结论:miRNA-223在骨肿瘤组织的表达明显下降,而与之相反的是ECT2的异常升高,miRNA-223和ECT2对骨肉瘤的发生发展机制有一定作用,miRNA-223与ECT2两者可能有一定的关联性。第二部分通过体外试验,Micro RNA-223对人骨肉瘤细胞病理生理机制作用的进一步探究目的:深入探讨micro RNA-223作用于骨肉瘤细胞对其病理生理机制的干扰,其中包括对细胞周期、细胞增殖与凋亡、细胞侵袭性的深刻影响。方法:用脂质体法将miRNA-223模拟物瞬时转染入人骨肉瘤细胞中,设立三个不同测试组,分别为A组空白对照组、B组miRNA-223转染组和C组阴性对照转染组,并通过高倍显微镜设备仔细观察转染效果情况并记录,RT-PCR分别检测空白组、阴性转染组、miRNA-223转染组中miRNA-223和ECT2的变化,再应用MTT增倍实验的试验方法分别进行检测空白对照组、阴性转染组和miRNA-223转染组内细胞的扩增变化情况,并使用流式细胞仪分别检测3个实验组细胞生长的状态,最后应用细胞侵袭实验分别检测3个实验组细胞的侵袭力是否不同。结果:Mi RNA-223转染组中miRNA-223的浓度显著增高,而空白试验组与阴性对照组无明显变化。与之相对应的转染组ECT2的浓度显著降低,有统计学意义(P0.05);Mi RNA223转染组中骨肉瘤细胞生长过程的各个环节均受到明显的改变,表现为增殖受抑,凋亡加速,肿瘤细胞的侵袭能力大幅度减弱,有统计学意义(P0.05)。结论:Mi RNA-223对人骨肉瘤细胞的增殖、侵袭有显著的阻碍作用,加速了肿瘤细胞的凋亡,同时我们发现随着miRNA-223的表达升高ECT2有明显降低受抑制的趋势。第三部分配对异常表达的Micro RNA-223和ECT2,不同表达组合对骨肉瘤预后的相关性探讨目的:探讨骨肉瘤中micro RNA-223/ECT2组合异常表达对骨肉瘤预后的干扰。方法:2006年至2009年新疆自治区人民医院和安徽医科大学一附院确诊的68例骨肉瘤患者。所有患者均给与术前新辅助化疗方案,化疗的药物包括甲氨蝶呤、多柔比星、顺铂、异环玲酰胺,治疗的给药途径是静脉注射。正规化疗周期完成后采取择期手术切除肿瘤病灶并行病理学检查确诊。病检部分必须包括骨肉瘤肿瘤组织、肿瘤周围组织、和正常的周围组织标本。再次通过完成实验一步骤并得到相关结果,我们以miR-223,ECT2的数值范围得出各自中位数,分别miR-223为2.50,ECT2为4.79.将。将miR-223,ECT2分为低于中位数表达和高于中位数表达,低于2.50的miR-223为低表达组共有38例,高表达组30例;低浓度的ECT2表达组共有32例,高浓度组36例。在此基础上,根据68个病人的结果,将他们分为四组10例miR-223低/ECT2低,28例miR-223低/ECT2高,22例miR-223高/ECT2低,8例miR-223高/ECT2高组。术后对患者进行详细的随访计划,术后化疗的随访分为2个阶段,以术后三年为分界线,三年之内的情况每3个月化疗一次,每半年进行一次全身肿瘤血复查,包括血液系统肿瘤标志物检查及全身PET-CT每年一次。术后3年之后根据病人情况每4-5个月进行一次联合化疗,必须完成PET-CT检查或全身多部位CT检查,血液系统肿瘤标志物的复查及手术部位核磁的检查必不可少并详细记录情况。根据随访结果治愈、复发、转移进行记录。结果:随访5.8-36.3个月,平均29.6个月,28例出现转移和复发,15例随访中死亡,3年的总生存率73.53%,3年无病生存率58.82.我们发现miR-223低表达/ECT2低表达组、miR-223低表达/ECT2高表达组、miR-223高表达/ECT2低表达组、miR-223高表达/ECT2高表达组4种不同情况的患者预后差异显著结论:miR-223/ECT2组合轴异常表达与人骨肉瘤侵袭性有显著相关,对于人骨肉瘤的预后有一定相关,同时我们发现miR-223低表达/ECT2高表达组预后极差。该组病理学分型恶性程度高、对于化疗的反应不敏感、术后复发率及转移率较其他各组明显升高。
【图文】：

骨肉瘤,浓度,正常组织

安徽医科大学博士学位论文1. RT-PCR检测骨肉瘤组织,肿瘤边缘组织,正常组织中MiRNA-223的变化我们对68例骨肉瘤组织,肿瘤边缘组织,正常组织通过实时定量RT-P分别检测miRNA-223的表达，以正常组织中miR223含量为一个标准单位瘤周围组织中miR223含量显著下降接近一半，在肿瘤组织内miR233含量单位的1/4。根据检查结果我们可以判定miR223与骨肉瘤肿瘤呈负相关(P1)实验结果

骨肉瘤,浓度

图2.ECT2在各组中的浓度表达，骨肉瘤中最高（P<0.05）讨论：骨肉瘤与软骨肉瘤、纤维肉瘤均是来源于间叶组织，但其恶性程度叶组织所涉及的恶性肿瘤中首屈一指，起源于骨母细胞，文献报道骨肉特点在电子显微镜下表现为梭形基质细胞的大量异生，病理生理机制特高，极度恶性，在发现初期即有可能出现血性转移或者其他部位的转移最终结局是灾难性的[1-3]，在今年的文献报告中，人类骨骼系统原发性恶年不断增加，其中骨肉瘤的增长居于领先地位，是发病最多死亡率最高高的骨肿瘤，据统计约为1.02／10万发病率[4]。在青少年中，，尤其是学龄适龄中小学学生中骨肿瘤凸显，流行病学调查高于其他不同年龄组[5.6]。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738.1

【参考文献】