长链非编码RNA-HTSG在肝癌中的表达和功能研究

发布时间：2019-10-28 12:36

【摘要】：目的:长链非编码RNA参与调控多种生物学功能,其异常表达可导致多种疾病包括肿瘤。通过高通量基因芯片技术筛选肝癌中差异表达的lnc RNA,探究其在肝癌的发生发展中的作用。方法:对16例肝癌及其癌旁组织进行高通量lnc RNA芯片,生物信息学分析筛选差异表达的lnc RNA,选择肝癌组织中显著下调的lnc RNA,命名为lnc-HTSG。结合数据库分析其基因组信息和结构功能信息,RT-PCR验证lnc-HTSG在肝癌中的差异表达。RACE实验确定lnc-HTSG两端序列,Overlap PCR扩增lnc-HTSG全长序列;构建重组p LVX-Aclnc-HTSG慢病毒质粒,包装慢病毒并感染肝癌细胞,RT-PCR检测lnc-HTSG过表达;设计引物检测lnc-HTSG 3'末端和5'末端转录终止情况以及3'末端加尾操作确保lnc-HTSG的转录完整性;通过靶向lnc-HTSG的si RNA,下调HCC-LM3内源性lnc-HTSG,重组病毒感染SMMU-7721细胞上调lnc-HTSG,细胞划痕修复实验、Transwell迁移和侵袭实验检测lnc-HTSG对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:通过lnc RNA芯片及信息学分析筛选在肝癌组织中表达显著下调的lnc-HTSG。数据库分析其具有转录表达特征,部分序列在进化上高保守,RT-PCR结果和表达谱芯片结果一致。RACE确定lnc-HTSG两端序列,克隆全长并构建慢病毒过表达系统,加尾实验证实lnc-HTSG转录完整性。体外细胞功能学实验表明,与对照组相比,下调lnc-HTSG的表达促进了HCC-LM3细胞的迁移和侵袭,而过表达lnc-HTSG抑制了SMMU-7721细胞的迁移。结论:长链非编码RNA-HTSG在肝癌组织中显著下调,其缺失可促进肝癌细胞的迁移和侵袭,是重要的肝癌抑癌基因。
【图文】：

图 1-1 lnc-HTSG 在肝癌及其癌旁组织中的差异表达（p<0.05）论生物的基因表达在机体不同的生长发育阶段、组织的不同分化同的生物或者物理因素刺激阶段，都会发生差异性的表达[12]。空下进行的差异选择构成了细胞生命活动复杂的调控机制和网析这些差异，可为生命活动过程的研究提供很多重要的线索。通过测定目的基因在疾病发展和治疗过程中的差异表达，可以多疾病的新方法，例如早期的诊断标志物等。基因的差异表达著的，，大部分肿瘤的进展是有诸多基因表达改变的积累引起的癌基因和各种调节通路的调控基因[13]。还有细胞周期调控、粘生等环节的调控基因[14]。这些基因的差异表达会导致肿瘤的细癌基因的差异累计通常会促进肿瘤增殖和侵袭。

第二部分 长链非编码 RNA-HTSG 在肝癌中的表达和功能研究1) 5 cycles：94 ℃ 30 s72 ℃ 3 min2) 5 cycles：94 ℃ 30 s70 ℃ 30 s72 ℃ 3 min3) 25 cycles：94 ℃ 30 s68 ℃ 30 s72 ℃ 3 min(6) 72 ℃延伸 10 min，终止反应，PCR 产物进行 1%琼脂糖凝胶电泳。整个 5'和 3'RACE 的流程设计可见下两图：
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

【共引文献】

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1 李惠芬;马桂芳;宋祥和;;肝癌衍生生长因子在胃腺癌组织中的表达及意义[J];海南医学;2014年07期

2 张学军;汤虎成;刘飞;;长链非编码RNA Gas5在非小细胞肺癌中的表达及意义[J];临床肺科杂志;2015年02期

本文编号：2553112