PAR-2调节食管鳞癌细胞增殖的机制研究

发布时间：2019-11-03 14:53

【摘要】：蛋白酶激活受体-2(Proteinase-actived receptors 2,PAR-2)是位于细胞膜表面的G蛋白藕联受体,该受体受激活后可引起一系列关于肿瘤生长、侵袭、转移等方面的生物学行为。食管癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,其发生机制目前还不太明确,是当前食管癌研究中重要的一个方面。本课题第一部分探讨PAR-2激动剂对人食管鳞癌细胞系EC-109 c-fos、CyclinD1、PCNA表达的影响,以及PAR-2 shRNA的负调控效应。实验结果显示PAR-2激动剂SLIGKV能促进食管癌细胞EC-109 c-fos、CyclinD1、PCNA mRNA及蛋白的表达水平;PAR-2基因表达下调的食管癌稳定细胞系PAR-2shRNA EC109中c-fos、CyclinD1、PCNA mRNA及蛋白表达均降低,表明PAR-2shRNA能负调控食管癌细胞EC-109 c-fos、CyclinD1、PCNA的表达。课题第二部分探讨PAR-2激动及抑制对食管癌细胞MAPK通路ERK1蛋白表达及活性的影响,以及对细胞内[Ca~(2+)]c浓度变化的影响。实验结果显示PAR-2激动剂SLIGKV能促进食管癌细胞ERK1 mRNA的表达水平,对ERK1总蛋白表达水平无影响,但能促进p-ERK1蛋白的表达,使ERK1蛋白活性增加;利用PAR-2 shRNA抑制PAR-2能下调ERK1 mRNA及p-ERK1蛋白的表达,但对ERK1总蛋白表达无影响。另研究表明PAR-2激动剂SLIGKV能使食管癌细胞胞内[Ca~(2+)]c浓度增加,抑制PAR-2则能抑制激动剂诱导的胞内[Ca~(2+)]c浓度的升高。课题第三部分探讨MAPK通路抑制剂对食管癌细胞增殖、细胞周期的影响,以及对c-fos、CyclinD1、PCNA表达的影响。MTT实验结果显示MAPK通路抑制剂PD98059能抑制食管癌细胞EC-109的增殖,呈浓度依赖性;经PD98059最有效药物浓度预处理食管癌细胞后,其能明显抑制SLIGKV诱导的细胞增殖,使癌细胞生长曲线下移;流式细胞术实验结果显示抑制剂PD98059能使G0/G1期食管癌细胞百分比增加,S期、G2/M期细胞百分比及细胞增殖指数降低。另结果显示抑制剂PD98059能下调c-fos、CyclinD1、PCNA mRNA及蛋白的表达水平。综上所述,PAR-2激动剂能促进食管鳞癌细胞系EC-109 c-fos、CyclinD1、PCNA、p-ERK1的表达,增加ERK1蛋白的活性,使癌细胞内[Ca~(2+)]c的浓度上升,PAR-2 shRNA则能负调控c-fos、CyclinD1、PCNA、p-ERK1的表达,降低ERK1蛋白的活性;MAPK通路抑制剂呈浓度依赖性的抑制食管癌细胞EC-109的增殖,且能明显抑制激动剂SLIGKV诱导的细胞增殖,使食管癌细胞生长曲线下移,另可增加G0/G1期食管癌细胞百分比,降低S期、G2/M期细胞百分比及细胞增殖指数,下调c-fos、CyclinD1、PCNA mRNA及蛋白的表达水平。以上结果表明,PAR-2可能是通过ERK1 MAPK通路及Ca~(2+)途径来调控肿瘤增殖相关分子及细胞周期相关分子c-fos、CyclinD1、PCNA的表达,进而来调节食管癌细胞的细胞周期,通过调控细胞周期来调控癌细胞的增殖,从而促进食管癌的发生。
【图文】：

反激,激动剂,对照组

14的影响。1：对照组；2：激动剂组；3：反激动剂组：4：PAR-2 shRNA 组Fig 1-1 mRNA expressions of PAR-2、c-fos、CyclinD1、PCNA after activation andinhibition of PAR-2.1:blank control;2:PAR-2 agonist group;3:PAR-2 anti-agonistgroup; 4:PAR-2 shRNA group1.2.2 Western-blot 法检测各组 PAR-2、c-fos、CyclinD1、PCNA 蛋白的表达结果

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医科大学博士学位论文一、PAR-2 对食管鳞癌细胞 c-fos、CyclinD1、PCNA 表达的影响-2 PAR-2 激动剂对 PAR-2、c-fos、CyclinD1、PCNA 蛋白表达变化的影响。照组；2：激动剂组；3：反激动剂组：4：PAR-2 shRNA 组1-2 Protein expressions of PAR-2、c-fos、CyclinD1、PCNA after activation andition of PAR-2.1:blank control;2:PAR-2 agonist group;3:PAR-2 anti-agonistp; 4:PAR-2 shRNA group
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.1

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