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siRNA沉默β-catenin基因对胃癌细胞hTERT影响的研究

发布时间:2019-11-13 12:18
【摘要】:目的:探讨RNA干扰技术靶向沉默β-catenin基因后对胃癌AGS细胞增殖、分裂周期和COX-2以及hTERT的影响。方法:利用RNA干扰技术将特异性β-catenin小干扰RNA序列转染至胃癌AGS细胞以沉默其基因表达,将实验设置为三组,设置实验组为转染siRNA-β-catenin的胃癌AGS细胞,阴性对照组为转染siRNA-control的胃癌AGS细胞,Blank组为未转染的正常AGS细胞。使用荧光显微镜检测荧光标记片段的转染效率,应用荧光定量-PCR检测靶向沉默β-catenin基因的表达和沉默效率,以及hTERT和COX-2基因的表达水平;蛋白免疫印记法检测β-catenin、hTERT和COX-2在蛋白水平的表达;MTT法检测各组细胞增殖,流式细胞术检测分析各组细胞周期。结果:转染siRNA特异性片段靶向沉默β-catenin基因可明显下调β-catenin的表达量(1.764±0.045 vs 1.00±0.043),实验组与阴性对照组相比差异有统计学意义(P0.05);hTERT mRNA的表达水平与阴性对照组比较明显抑制(2.37±0.022 vs 1.00±0.030),差异有统计学意义(P0.05);Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因COX-2 mRNA的表达水平下调(1.84±0.057 vs 1.00±0.038),差异有统计学意义(P0.05)。沉默β-catenin基因后β-catenin, hTERT和COX-2蛋白相对表达量受到抑制,实验组对比于阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05)。MTT法检测细胞在转染后第3天增殖能力明显下降(P0.05);流式细胞术检测发现沉默β-catenin基因72小时后可抑制细胞周期,相比于阴性对照组实验组细胞周期的差异有统计学意义(P0.05)。结论:抑制β-catenin基因后能降低胃癌AGS细胞的增殖能力,阻断细胞周期和降低COX-2的表达,β-catenin基因有望成为胃癌治疗新靶点;Wnt/β-catenin信号通路可能参与hTERT的调控,并通过hTERT及端粒酶发挥某些生物学功能。
【图文】:

细胞转染


结果当设置siRNA:Transfec化nReagent为4:邋3、转染化时后可在巧逡逑光显微镜下观察到细胞内siRNA携带的巧光片段,与相同视野下转换至普通显逡逑微镜所观察到的活细胞计数对比,转染效率可达80%W上(详见图3.1)。逡逑IB逡逑普通显岕镜黄光显微镜逡逑图3.1邋AGS细胞转染后检测(200X)逡逑Fig.3.1邋Detection邋of邋AGS邋cells邋比ansfected邋(200邋X)逡逑3.2沉默目-catenin基因对胃癌AGS细胞增殖能力的影响逡逑运用胁Ai技术{南虺聊穑悖幔簦澹睿椋罨蚝螅停裕苑觳饨峁淌惧义希觧,A-P-catenin组细胞的增殖能力明显降低,与siRNA-control姐相比在生长第逡逑3天后增殖能力有统计学差异(0.49±0.025vs0.65±0.037);而siRNA-control狙逡逑与Blank组相比,细胞增殖能力无思著统计学差异(化65±0.037邋vs邋0.6化化023)逡逑(详见图3.2)。逡逑17逡逑

转染,胃癌细胞,周期分布,统计学


siRNA-control邋组邋Gi邋期(56.23%±1.53%)相比有统计学差异;而邋siRNA-control邋组逡逑Gi期(56.23%±1.53%)与Blank组细胞Gi期(55.52%±1.52%)相比无明显统计学差逡逑异(详见图3.3)。逡逑i邋.邋B邋I邋ir邋j邋W逡逑LLULLL逡逑Blank逦siRNA-conlrol逦siRNA-p-caleiiiii逡逑图3.3转染后检测S细细胞的周期分布,,上图分别代表了邋Blank细、siRNA-control组和逡逑siRNA-P-catenin组3组细胞的周期分布情况逡逑Fig.3.3邋Detection邋of邋three邋groups邋of邋cell邋cycle邋after邋化ansfected
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R735.2

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本文编号:2560302

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