C反应蛋白在体外促进肝细胞癌迁移侵袭的分子机制研究

发布时间：2019-11-20 10:00

【摘要】：肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界排名第六的癌症,也是因癌症死亡的第三大病因。HCC患者的预后和存活与肿瘤转移的程度密切相关。然而HCC发生转移的机制仍不清楚。本实验是旨在探讨C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)在体外影响肝癌细胞生物学行为的相关分子机制。通过免疫组化检测到CRP在肝癌组织中是高表达的。并且CRP沉默后在体外抑制HCC转移。运用iTRAQ的质谱筛选CRP siRNA和阴性对照siRNA处理Hep G2后分泌蛋白的中差异表达的蛋白。本实验筛选出109个差异表达的蛋白,其中45个是上调的,64个是下调的。进一步运用Western Blot和实时荧光定量PCR验证差异表达的蛋白。在这些差异表达的蛋白中发现IL-11,CTSD这些与肿瘤的转移密切相关的蛋白明显下调。此外,我们还发现Hep G2细胞中CRP沉默后,下调了HIF-1α的表达水平,降低了HIF-1α的荧光素酶活性以及ERK和Akt磷酸化。结论是本实验运用了定量蛋白质组学方法筛选出CRP促进HCC体外侵袭和迁移的相关蛋白,还发现CRP沉默后可能是通过MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路降低HIF-1α活性后抑制了HCC转移。
【图文】：

重庆医科大学硕士研究生学位论文 实验结果.1 相比于癌旁组织,肝癌组织中 CRP 是高表达的利用组织芯片的免疫组化染色检测 CRP 的表达，每个芯片含有 40 例肝癌和 40 例癌旁组织。用染色指数评价目的蛋白的表达水平。染色强度分为 0~性细胞的百分比为 0-100，，两者相乘的结果为最后的得分。研究结果发现 C肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织（如图 1.1）。

1.2 Western blot 检测 CRP siRNA 处理HepG2 和BEL 7402细胞后 CRP 蛋白在细胞和细胞内的表达水平igure 1.2 Cells were transfected with CRP-targeted siRNAs. Western blot analysis shows the silencing of CRP significantly reduced CRP protein levels, intracellular CRP(Ic-CRand extracellular CRP (Ec-CRP) of HepG2 and BEL 7402cells.The respective gray scaleanalysis results are shown..3 CRPsiRNA 转染后对肝癌侵袭能力的影响侵袭迁移是肿瘤细胞的一个很重要的生物学功能，与肿瘤患者的预后有一联系。本实验在体外用 CRP siRNA, Negative siRNA 处理 HepG2 和 BEL7402 究结果显示转染 CRP siRNA 的两株肝癌细胞侵袭能力分别明显下降了 63 %%（如图 1.3）。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

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本文编号：2563515