杨梅素对胆囊癌NOZ细胞体外凋亡机制的实验研究

发布时间：2019-11-23 23:43

【摘要】：研究背景及目的:胆囊癌是一种原发于胆囊的恶性肿瘤,早期诊断困难,手术根治性切除率低,同时对化疗药物相对不敏感,预后差,术后易复发转移。因此研究出针对胆囊癌治疗的新手段尤为重要。杨梅素是从杨梅科属植物的叶、皮及根中提取出来的一种黄酮类化合物,临床上可用于消炎、抗氧化、止痛、降低血糖和保护肝脏等多种治疗。近年来,各种研究表明药物杨梅素在抗癌方面也有明显的效果。因此,本研究目的是探讨杨梅素体外对胆囊癌NOZ细胞的凋亡效应及其作用机制,为胆囊癌化疗提供新的途径。方法:本研究是通过体外细胞实验完成的。设实验组(加杨梅素)及对照组(未加杨梅素)进行比较。通过CCK8实验及单克隆实验观察杨梅素对胆囊癌NOZ细胞的增殖抑制作用;利用流式细胞仪分析杨梅素对胆囊癌NOZ细胞凋亡的影响;采用Western blot实验检测杨梅素作用前后线粒体调往途径中相关蛋白的表达情况。结果:1.杨梅素可明显抑制胆囊癌NOZ细胞的增殖及克隆能力。随着杨梅素作用浓度的增加及孵育时间的延长,其杀伤细胞的能力显著增加。2.杨梅素可诱导胆囊癌NOZ细胞发生凋亡。与对照组比较,实验组细胞凋亡率明显上升,且其晚期凋亡率的上升更加显著。3.杨梅素通过调控Bax、Cytc、PARP及Bcl-2蛋白的表达来诱导胆囊癌NOZ细胞凋亡程序的运行。结论:1.杨梅素对胆囊癌NOZ细胞有明显的抑制效果,具有剂量、时间依赖性。2.随着杨梅素浓度增加,胆囊癌NOZ细胞凋亡率明显增加,同时其晚期凋亡率上升更加显著。3.杨梅素诱导胆囊癌NOZ细胞凋亡的机制可能与Bcl-2家族介导的线粒体凋亡途径有关,但其具体机制还需进一步探讨。本研究旨在为胆囊癌深入全面的研究提供参考,以及为胆囊癌药物化疗提供新的方向。
【图文】：

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素对胆囊癌 NOZ 细胞生长抑制的影响：实验将 6 个浓度的杨梅素（10、20、40、60、80、100 umol/L）加胞中，，分别记录 24、48、72h 三个时间点细胞增殖的情况，通过度杨梅素三个时间点对细胞增殖的影响（图 1），结果发现：1）当mol/L 以下时，该药对胆囊癌 NOZ 细胞无明显抑制效果；2）当杨mol/L 时，该药对胆囊癌 NOZ 细胞的抑制效果超过了 80%，且存杨梅素浓度也不能再明显提升其抑制效果；3）当杨梅素浓度在 2 之间时，该药对胆囊癌 NOZ 细胞有明显的抑制效果，且呈现剂量素作用浓度相同时，细胞培养时间越长，该药对细胞抑制效果越性。通过细胞生长抑制曲线显示：24、48、72h 三个时间点 IC50（为 50、45、38umol/L，于是选择最适浓度 40 umol/L 及最有效浓度完成后续实验；选择较为稳定的 48h 这个点作为最佳研究时间。

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山西医科大学硕士学位论文在不同浓度的杨梅素（40、80umol/L）作用于胆囊癌 NOZ 细胞 48h 后置于光镜下进行观察(图 2)。图中显示：相对于对照组而言，实验组细胞数目减少，且杨梅素浓度越大细胞数目减少越明显，提示杨梅素对细胞造成了破坏，猜测其可能诱导细胞发生了凋亡。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.8

【参考文献】