肿瘤相关抗原特异性T细胞治疗急性髓系白血病的临床研究

发布时间：2019-11-25 20:49

【摘要】：研究背景:AML(急性髓系白血病)是造血系统的一类恶性肿瘤,对其分子生物学特征和临床治疗方面,除了急性早幼粒细胞白血病(M3)有比较深入的了解,能够针对靶基因采取诱导分化治疗外,其他的髓系白血病仍以联合化疗为主,其次为自体造血干细胞移植及异基因造血干细胞移植。部分患者经化疗可获得完全缓解,但多数肿瘤患者5年CCR(持续完全缓解)概率较低,治疗失败的主要原因是体内残留白血病复发。异基因造血干细胞移植后肿瘤复发率较低,但一般只适合50岁以下的患者,需要HLA(人类白细胞抗原)配型相合的供者,并发症较多,费用高,能接受异基因造血干细胞移植治疗的患者较少,而且仍有部分患者复发。因此,包括急性白血病在内的多种血液系统恶性肿瘤的攻克需要发展新的治疗方法。目的:TAA-CTL(肿瘤相关抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞)由肿瘤抗原激活并赋予抗肿瘤的特异性。目前已经可以采用多种手段在体外制备具有肿瘤相关抗原特异性的免疫活性CTL,并在临床试验中展示初步其有效的抗肿瘤作用。尽管如此,由于受不同个体和不同肿瘤抗原的多样性、肿瘤抗原递呈的有效性以及特异性肿瘤抗原鉴定和分离技术等条件的限制,目前TAA-CTL的制备技术尚需进一步完善,也限制了它的广泛应用。本研究旨在建立TAA-CTL治疗技术体系,并对靶向多种肿瘤相关抗原(NY-ESO-1、MAGEA3、PRAME、Survivin 和 WT-1)的自体 TAA-CTL治疗AML的安全性和有效性予以初步探讨。方法:抽取AML患者外周血100ml,分离外周血单个核细胞,培养DC(树突细胞)并附载多种白血病相关抗原混合多肽(NY-ESO-1、MAGEA3、PRAME、Survivin和WT-1),将DC与自体外周血单个核细胞共培养,制备白血病抗原特异性T细胞,3周后回输患者。回输后同时予以皮下注射IL-2 100-150万IU/天× 14天。9例患者均为中高危AML(非M3)。回输TAA-CTL前,骨髓复发者2例、MRD+(流式细胞术)者3例、MRD-者4例;中位年龄51岁(30-68岁)。留取回输前的TAA-CTL用于流式细胞术测定细胞表型特征。在TAA-CTL输注患者体内后分别于第一周,第二周,第三周,第四周抽取患者外周血,提取单个核细胞用于ELISpot检测,根据其分泌γ-干扰素水平测定TAA-CTL的活性。结果:每个患者接受1-3次TAA-CTL细胞回输,每次1.04-5.08×107个细胞/m2。全部9例患者输注过程中和输注后无明显的不良反应,2例患者使用IL-2后出现发热和注射部位肿胀,停用IL-2后症状消失。9例患者中用作辅助治疗的4例MRD-患者,目前仍为MRD-(10-23个月,随访中,均未接受其它治疗)。2例由MRD-转为MRD+的患者,经过1个疗程TAA-CTL细胞治疗后,MRD均转为持续阴性(9个月和13个月,随访中,均未接受其它治疗)。1例经多个疗程化疗后MRD仍为阳性的患者,回输TAA-CTL细胞前给予地西他滨(10mg/m2,d1-5)1个疗程后,MRD转为阴性,但5个月后患者复发,再次行TAA-CTL联合地西他滨+CAG方案后疾病仍未缓解,后接受诱导化疗,但原发病始终未缓解,目前予以姑息治疗中,病情稳定。2例复发患者中,1例经过1个疗程TAA-CTL的后疾病稳定,2个月后再次给予回输TAA-CTL,同时给予地西他滨联合CAG方案化疗后达到CR,此后予以强化巩固治疗,但疾病于6个月后复发,并于8个月后因感染及出血死亡;另1例经过1个疗程TAA-CTL+地西他滨联合CAG方案化疗后达到CR(9个月,随访中,未接受其他治疗)。CTL细胞表型检测部分:培养细胞以CD3+T为主(93.5%,56.5%-99%),少量的 NK 细胞(CD3-D56+,4.9%,0.3%-9.8%)和极少量的B细胞(CD19+,0.3%,0-0.6%)。CD3+T细胞中CD8+T细胞和CD4+T细胞分别占 43.2%(5.5%-64%),和 37.4%(3.2%-57.1%)。CD8+T 细胞中,效应记忆 T细胞(CD45RO+CD62L-CCR7-)占 50.2%(3.9%-78%),中枢记忆 T 细胞(CD45RO+CD62L+CCR7+)占 13.50%(0.8%-21%),初始 T 细胞(CD45RA+CD62L+CCR7+)占 2.1%(0.5%-3.9%);CD4+T 细胞中,效应记忆 T 细胞占 46.7%(5.6%-63.3%),中枢记忆 T 细胞占 5.7%,(0-12.3%),初始 T 细胞占 3.9%(0-8.9%)。ELISpot实验显示,对于接受过1次TAA-CTL治疗患者中,动态检测患者外周血SFC(斑点形成细胞)变化,提示随着时间推移,SFC曲线逐渐升高,后逐渐回落,平均最高峰发生在输注细胞后2.3周,部分接受2-3次细胞治疗的患者,结合患者临床表现,持续缓解患者外周血检测的SFC数量较多,最多可达253/2*105个细胞,而原发病数月内复发,持续不缓解患者SFC数量低,曲线低平。结论:靶向多种肿瘤相关抗原(NY-ESO-1、MAGEA3、PRAME、Survivin和WT-1)的自体TAA-CTL治疗AML具有很好的安全性,并初步显示其临床疗效。TAA-CTL制备过程中可产生一系列细胞,流式检测结果以效应记忆T细胞为优势亚群,ELISpot实验结果提示斑点形成的数目多少与患者疗效密切相关。但其长期疗效、以及联合地西他滨等化疗是否有助于进一步增强自体TAA-CTL的疗效等有待于进一步研究。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.71

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本文编号：2565853