TGF-β1在宫颈癌相关成纤维细胞生成中的作用研究

发布时间：2019-11-29 18:26

【摘要】：背景及目的尽管人类乳头瘤状病毒疫苗的广泛应用和宫颈癌的定期筛查,宫颈癌仍是造成全球妇女死亡的最常见的恶性肿瘤之一,其发病率呈年轻化趋势。因此探寻宫颈癌的发病机制及寻找新的治疗方法显得尤为迫切。肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境中最主要的细胞,与肌成纤维细胞相似,在细胞形态和生物学行为上具有平滑肌细胞和成纤维细胞的双重特性。它可以分泌多种细胞因子,促使肿瘤上皮细胞的恶性转化与进展。尽管不同类型的间质细胞和上皮细胞被认为是CAFs的前体细胞,但宫颈癌相关成纤维细胞的确切来源及其机制目前仍不清楚。人转化生长因子β1(transforming growth factor,TGF-β1)广泛存在于组织中,在诱导肌成纤维细胞表型形成中具有重要作用,它能上调体内和体外成纤维细胞中平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的含量。研究证实,在宫颈癌上皮细胞中可见大量的TGF-β1的表达,明显高于正常宫颈上皮细胞和宫颈上皮内瘤变上皮细胞。TGF-β1在宫颈癌中的过表达可能成为CAFs转化的潜在机制。但CAFs的转化是否依赖于TGF-β1目前尚不明确。本研究旨在分离纯化并鉴定CAFs,初步探讨CAFs的生物学特性。研究TGF-β1在宫颈癌相关成纤维细胞生成中的作用。材料和方法1.用胶原酶消化法分离正常宫颈成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)和CAFs;在倒置相差显微镜下观察细胞形态;用CCK-8法测定细胞生长曲线;免疫荧光法及蛋白质印迹法检测细胞标志物波形蛋白(Vimentin)、α-SMA和成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation proteinα,FAPα)。2.ELISA法检测CAFs和Hela细胞共培养、Hela、CAFs细胞上清液中TGF-β1的水平。3.重组人TGFβ1处理NFs,设空白对照组,72h后收集成纤维细胞,免疫荧光法及蛋白质印迹法检测细胞标志物α-SMA和FAPα。4.统计学处理:采用SPSS17.0软件对数据进行分析。计量数据采用均数±标准差(`x±s)表示。组间比较采用非参数检验。检验水准α=0.05。P0.05为差异有统计学意义。结果1.成功分离出CAFs和NFs,镜下可见CAFs大小、形状不一,密度抑制和接触抑制消失。NFs大小、形状一致,存在密度抑制和接触抑制。CAFs的生长速度快于NFs(Z=㧟2.160,P=0.031)。CAF高表达α-SMA和FAPα,而NFs不表达α-SMA和FAPα,两者均表达Vimentin。2.CAFs和Hela细胞共培养、CAFs、Hela细胞上清液中TGF-β1的浓度分别为1087.26.54±71.42 ng/L,449.93±19.99 ng/L,703.29±27.34 ng/L。3.TGF-β1处理组高表达FAPα和α-SMA;空白对照组不表达FAPα和α-SMA。结论1.CAFs具有平滑肌细胞和成纤维细胞双重特性,其增殖能力强于NFs。2.TGF-β1可在体外诱导NFs向宫颈癌相关成纤维细胞转变。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33

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