论文检索
论文发表
当前位置：主页 > 医学论文 > 肿瘤论文 >

肝素酶对肝癌细胞粘附、侵袭及内皮细胞P选择素定位的影响

发布时间：2020-02-08 08:16
【摘要】：目的:体外实验观察不同肝素酶(Heparanase,HPSE)表达水平的肝癌细胞株的粘附、侵袭能力,并探究HPSE对内皮细胞P选择素细胞定位的影响。方法:1、细胞慢病毒转染(Lv):选用肝癌细胞株HepG2作为实验用细胞株,分别予以HPSE过表达及RNAi的慢病毒予以转染,通过qRT-PCR及Western-blot技术检测转染细胞中HPSE基因及其蛋白的表达水平;2、细胞功能实验:分别通过细胞粘附实验,增殖实验,侵袭、迁移实验检测转染细胞的粘附、增殖、侵袭及迁移能力;3、细胞免疫荧光:分别予以人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)与转染细胞进行非接触性共培养,通过细胞免疫荧光观察不同HPSE作用下P选择素在HUVECs中细胞定位;4、ELISA实验:通过ELISA检测非接触性共培养下室培养基中可溶性CD62P的含量。结果:1、qRT-PCR结果:HPSE过表达组中,Lv转染HPSE的Hep G2细胞HPSE mRNA的表达明显高于阴性对照(NC)(P㩳0.05);HPSE RNAi组中,三组Lv转染HPSE的HepG2细胞HPSE mRNA的表达明显低于NC(P㩳0.05);2、Western-blot结果:在HPSE过表达组中,Lv转染HPSE的HepG2细胞HPSE蛋白的表达明显高于NC;HPSE RNAi干扰组中,三组Lv转染HPSE RNAi的HepG2细胞HPSE蛋白表达明显低于NC,且Lv转染HPSE RNAi1 HepG2细胞中HPSE蛋白表达量低于Lv转染HPSE RNAi2、3 HepG2细胞;3、细胞功能实验:HPSE过表达组中,Lv转染HPSE的HepG2的细胞增殖、粘附、侵袭及迁移能力均大于NC,差异有统计学意义(P㩳0.05);HPSE RNAi组中,Lv转染HPSE RNAi的HepG2细胞增殖、粘附、侵袭能力均小于NC,差异有统计学意义(P㩳0.05),但Lv转染HPSE RNAi的HepG2的细胞迁移能力与NC无统计学差异(P㧐0.05);4、细胞免疫荧光实验:在不同HPSE表达水平的转染HepG2作用下,均可见CD62P表达HUVECs胞质中;5、ELISA实验:HPSE过表达组,Lv转染HPSE的HepG2细胞作用下HUVECs培养上清液中可溶性CD62P的含量与NC无统计学意义(P㧐0.05);HPSE RNAi组,Lv转染HPSE RNAi HepG2的细胞作用下HUVECs培养上清液中可溶性CD62P的含量与NC无统计学意义(P㧐0.05)。结论:HPSE过表达及RNAi慢病毒转染HepG2细胞可有效上调及下调HPSE基因及蛋白表达;体外实验HepG2内HPSE表达上调可增加细胞的增殖、粘附、侵袭及迁移能力;HepG2内HPSE表达下调使细胞的增殖、粘附、侵袭能力减弱,但对细胞的迁移能力无影响;不同HPSE表达水平HepG2作用下,CD62P均表达于HUVECs细胞胞质内,但对HUVECs培养上清液中可溶性CD62P的含量无影响。
【图文】：

慢病毒,转染,过表达,细胞


图 1 荧光显微镜下观察的 HPSE 过表达及 RNAi 慢病毒转染 HepG2 细胞注 1-A：明视野下 HPSE 过表达慢病毒转染 HepG-2 细胞后（SP×100）；1-B：HPSE 过表达慢病毒转染 HepG-2 细胞后（SP×100，荧光标记基因 GFP1-C：明视野下 HPSE 过表达阴性对照转染 HepG-2 细胞后（SP×100）；1-D：HPSE 过表达阴性对照转染 HepG-2 细胞后（SP×100，荧光标记基因 G1-E：明视野下 HPSE RNAi1 慢病毒转染 HepG-2 细胞后（SP×100）；1-F：HPSE RNAi1 慢病毒转染 HepG-2 细胞后（SP×100，荧光标记基因 GFP1-G：明视野下 HPSE RNAi2 慢病毒转染 HepG-2 细胞后（SP×100）；1-H：HPSE RNAi2 慢病毒转染 HepG-2 细胞后（SP×100，荧光标记基因 GFP1-I：明视野下 HPSE RNAi3 慢病毒转染 HepG-2 细胞后（SP×100）；1-J：HPSE RNAi3 慢病毒转染 HepG-2 细胞后（SP×100，荧光标记基因 GFP1-K：明视野下 HPSE RNAi 阴性对照转染 HepG-2 细胞后（SP×100）；

慢病毒,过表达,转染


图 2 HPSE 过表达（2-A）及 RNAi 慢病毒（2-B）转染HepG2 细胞 HPSE 基因的表达水平RT-PCR 检测 HPSE 过表达及 RNAi 慢病毒转染的 HepG2 细胞中 HPSE 基达水平变化：如图 2-A 所示，，HPSE 过表达 HepG2 细胞组中，Lv-HPSE2 细胞中 HPSE 基因的表达量明显高于 NC，差异具有显著统计学意义（P1）；图 2-B 所示，Lv-HPSE RNAi1、2、3 HepG2 细胞中 HPSE 基因表达量低于 NC，差异具有显著统计学意义（P㩳0.01）；其中 Lv-HPSE RNAi12 细胞中 HPSE 的表达量低于 Lv-HPSE RNAi2、3 HepG2 细胞中 HPSE 基量。estern Blot 检测 HPSE 蛋白的表达
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

【参考文献】

相关期刊论文 前9条

1 陈新创;黄黎明;蒋国强;;血清可溶性E-选择素检测对乳腺癌远处转移的预测价值[J];中华危重症医学杂志(电子版);2016年02期

2 师腾瑞;于卫华;海春旭;秦绪军;;活性氧调控细胞增殖的分子机制研究进展[J];癌变·畸变·突变;2015年06期

3 陈晓鹏;罗俊生;田野;聂宸麟;崔巍;张卫东;;肝素酶调节对肝癌细胞粘附侵袭能力的影响[J];中国肿瘤临床;2014年18期

4 王炼炼;邓幼林;李聪;;Chk1基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖及细胞周期调控的影响及可能机制[J];重庆医科大学学报;2014年11期

5 范磊;吴强;邢晓娟;刘郁东;邵增务;;Targeted Silencing of Heparanase Gene by Small Interfering RNA Inhibits Invasiveness and Metastasis of Osteosarcoma Cells[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2011年03期

6 张梁;黄涵;周娜;邓巧莹;黄永秩;;结直肠癌患者血清可溶性E-选择素及细胞黏附分子-1水平及临床意义[J];检验医学;2010年08期

7 樊嘉;史颖弘;;肝癌复发和转移的新理念[J];中华消化外科杂志;2010年01期

8 陈孝平,裘法祖,吴在德,何松青,张万广,刘安重,孟春城,江斌,乔森,潘华锋,史光军,曹斌;肝细胞癌门静脉癌栓形成的分子生物学机制研究[J];中华实验外科杂志;2005年09期

9 ;Interaction of vascular endothelial cells with leukocytes, platelets and cancer cells in inflammation, thrombosis and cancer growth and metastasis[J];Acta Pharmacologica Sinica;2003年12期



本文编号：2577463

资料下载
论文发表

本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/2577463.html

上一篇：腹腔镜盆腹腔淋巴结清扫术后淋巴囊肿的诊治进展  
下一篇：c-Met、可溶性c-Met在肺癌中的表达及意义研究
论文发表
最近更新
教材专著
热点文章

Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明：资料由用户5bcc3***提供，本站仅收录摘要或目录，作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com