胰腺癌前病变小鼠模型血清早期诊断microRNA的筛选研究

发布时间：2020-02-24 22:42

【摘要】：背景族腺癌发病机制复杂,难以早期诊断,临床上确诊膜腺癌患者的手术可切除率低,术后生存期相对其他肿瘤较短。然而,关于膜腺癌发病机制的研巧表明,膜腺癌的发生经历了相当长的过程,从获得关键的致病基因突变、逐渐发展为膜腺癌前病变、最终发展为膜腺癌,需要经历大约十年的时间。膜腺癌前病变如能早期诊断、及时治疗,可提高该疾病的治疗效果;然而,略床上缺乏早期筛查膜腺癌前病变的标志物。MicroRNA是一种22个碱基长度的核糖核酸,能在血清中稳定存在,是一种潜在的血清诊断标志物。Kras~(G12D)突变转基因小鼠通过肤腺细胞特异性启动子,仅在膜腺细胞内产生具有致癌活性的Kras6i2D突变蛋白;该小鼠可自发经妨巧常膜腺-膜腺癌前病变-膜腺癌"过程。通过构建繁殖Kras~(G12D)突变小鼠,并在膜腺癌前病变阶段留取小鼠外周血清,通过microRNA芯片和实时定量PCR的方法,定量测定Kras~(G12D)小鼠外周血清中特异性高表达的microRNA,为临床筛选族腺癌前病变的候选分子。目的1.饲养KraseisD转基因小鼠,无药物干预,培养族腺癌前病变自然病程组小鼠;2.通过雨蛙化,诱导Kras~(G12D);突变转基因小鼠产生族腺炎,培养膜腺炎-族腺癌前病变组小鼠;3.通过microRNA忍片,筛选出膜腺炎-膜腺癌前病变中血清离表达microRNA;4.通过生物信息方法,筛选出microRNA分子作为验证对象;5.通过实时定量PCR,检测候选的microRNA在膜腺癌前病变血清的表达来量。方法1.通过剪取小鼠鼠患消化提取DNA;再通过特异性引物,扩增Kras~(G12D)突变基因和Cre重沮酶基因;进而确定小鼠基因型;2.通过腹腔注射雨蛙r，

本文编号：2582551