丹皮酚对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力及对MAPKs信号通路的影响

发布时间：2020-03-21 21:43

【摘要】：目的:以体外培养的人肺癌A549细胞为研究对象,探讨中药单体丹皮酚对人肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移能力以及MAPKs信号通路的影响,为抗肺癌新药的研发提供理论依据。方法:体外培养对数期肺癌A549细胞,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测不同浓度丹皮酚对肺癌A549细胞系的抑制率,计算半数抑制浓度(IC50)。将实验对象分为空白对照组、不同浓度的丹皮酚(6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L)干预组,通过细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测不同浓度丹皮酚对A549细胞迁移及侵袭能力的影响。酶联免疫吸附法(Elisa)检测经不同浓度丹皮酚处理24 h后培养上清中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)表达水平。Western blot法检测A549细胞内MAPKs信号通路中ERK、p-ERK1/2,JNK、p-JNK及P38、p-P38等通路关键蛋白表达水平的变化情况。结果:丹皮酚对A549细胞的增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性,对A549细胞的IC50为54.68±3.59μg/m L。细胞划痕实验结果证实:不同浓度(6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L)的丹皮酚以浓度依赖的方式抑制A549细胞的迁移,,随着各组药物干预浓度增加,24 h划痕愈合率逐渐降低,与空白对照组(0μg/m L)相比,差异有统计学意义(P0.05)。Transwell小室实验结果证实,不同浓度的丹皮酚作用24 h后,A549细胞的侵袭能力明显受到抑制,且随着丹皮酚浓度增大,穿过微孔滤膜的细胞数逐渐降低,与空白对照组(0μg/m L)相比,差异有统计学意义(P0.05)。Elisa检测发现6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L的丹皮酚组可降低A549细胞培养上清分泌性MMP-2和MMP-9的表达水平,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)Western blot结果提示12.5μg/m L、25μg/m L的丹皮酚组可抑制MAPKs信号通路中ERK1/2通路p-ERK蛋白的磷酸化水平,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P0.05),而对P38、JNK通路的蛋白磷酸化水平无明显影响。结论:在一定浓度范围内,丹皮酚可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,下调分泌蛋白MMP-2和MMP-9的表达,其机制可能与抑制MAPKs信号通路中的ERK1/2通路有关。
【图文】：

丹皮酚,迁移能力,细胞侵袭

1 不同浓度的丹皮酚对 A549 细胞迁移能力的痕实验结果（放大 100 倍）:图 a-d：药物干预前（0干预 24 h 后的划痕；图 a, e ：空白对照组；图 b, c, g：12.5 μg/mL 丹皮酚组；图 d, h：25 μg/mL 丹统计学分析结果（n=3）: 与空白对照组（0 μg/mL）酚对 A549 细胞侵袭能力的影响ll 侵袭实验结果表明，经不同浓度（6.25 μg/mL、1丹皮酚作用 24 h 后，A549 细胞的侵袭能力明显受到抑穿过微孔滤膜的细胞数逐渐降低，与空白对照组（0 μ学意义（P＜0.05）。丹皮酚对 A549 细胞侵袭能力的抑

丹皮酚,分泌性,表达水平,细胞侵袭

图 2 不同浓度的丹皮酚对 A549 细胞侵袭能力的ranswell 小室侵袭实验结果（放大 100 倍）：图 a：空白/mL 丹皮酚组；图 c：12.5 μg/mL 丹皮酚组；图 d,：25膜细胞数的统计学分析结果（n=3）: 与空白对照组（0 ；**P＜0.01。皮酚对 A549 细胞 MMP-2 和 MMP-9 表达水平的影结果表明，12.5 μg/mL、25 μg/mL 的丹皮酚作用 24 h 上清分泌性 MMP-2 的表达水平，与空白对照组相比，，差异5）。6.25 μg/mL、12.5 μg/mL、25 μg/mL 的丹皮酚均9 的表达，与空白对照组相比，差异有统计学意义（P＜浓度丹皮酚作用于 A549 细胞 24 h 后分泌性 MMP-2、MMP-
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2

【参考文献】