角蛋白18在BCRP介导的乳腺癌细胞多药耐药中的作用及机制研究

发布时间：2020-03-30 12:50

【摘要】：背景与目的:多药耐药(multidrug resistance,MDR)和转移是导致乳腺癌治疗失败的两大重要因素。乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)的过度表达和/或外排功能增强是MDR产生的主要原因之一。具有MDR的乳腺癌细胞存在更强的迁移/侵袭能力。上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)与乳腺癌的发展密切相关,在MDR、迁移、侵袭和干细胞特性方面尤为明显。细胞角蛋白18(Cytokeratin18,CK18)表达下调是EMT的标志之一,在肿瘤诊断、乳腺癌预后方面发挥重要作用,但其在BCRP介导的乳腺癌MDR中的作用及主要机制,国内外报道甚少。本研究以人乳腺癌敏感株MCF-7和MX诱导的、BCRP高表达的耐药株MCF-7/MX为细胞模型,旨在探讨MDR细胞异常转移的主要机制,主要就CK18在BCRP介导的乳腺癌MDR、迁移和侵袭的作用及机制进行研究。方法:1.MTT实验测定MCF-7、MCF-7/MX细胞对不同化疗药物敏感性差异;Western blot测定BCRP等耐药蛋白在MCF-7和MCF-7/MX细胞的表达差异。2.Real time-qPCR、Western blot测定MCF-7、MCF-7/MX细胞CK18表达差异。3.ShRNA靶向干扰MCF-7细胞CK18表达,采用Real time-qPCR、Western blot检测CK18表达下调程度,筛选出两株干扰程度不同的单克隆细胞株。4.MTT实验测定MCF-7、单克隆细胞株及阴性对照细胞株对不同化疗药物耐药差异;Western blot检测上述细胞BCRP表达差异。5.显微镜观察上述五种细胞形态变化;Transwell迁移及侵袭、细胞-基质粘附实验测定其迁移、侵袭及细胞-粘附能力;RT-PCR、Western blot测定其EMT相关基因及蛋白表达。6.RT-PCR、Western blot测定各组细胞中核因子-κB 65(nuclear factor-κB 65,NF-κB p65)、Snail、Claudin1基因及蛋白表达。结果:1.MCF-7/MX细胞的MDR表型由BCRP介导。与敏感株MCF-7相比,MCF-7/MX对多种化疗药物显著耐药(P0.001),BCRP蛋白表达明显升高(P0.001)。2.MCF-7/MX细胞在形态与功能上均发生了EMT。MCF-7细胞呈典型的上皮细胞形态,而MCF-7/MX细胞呈间质细胞表型。与MCF-7细胞相比,MCF-7/MX细胞的迁移和侵袭能力均显著增强(P0.001),细胞-基质粘附能力减弱(P0.001),上皮标志蛋白E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P0.001),间质特异蛋白N-cadherin和vimentin m RNA和蛋白表达水平均明显增加(P0.001)。3.CK18参与了BCRP介导的乳腺癌MDR。与MCF-7细胞相比,MCF-7/MX细胞的CK18 m RNA及蛋白表达水平均明显降低(P0.001)。ShRNA靶向干扰CK18表达,与亲本MCF-7细胞相比,阴性对照MCF-7/siNC细胞对多种化疗药物敏感性变化不明显,差异无显著性(P0.05),BCRP蛋白的表达变化不明显,差异无显著性(P0.05),而CK18下调组对化疗药物敏感性明显下降(P0.01),BCRP蛋白表达显著升高(P0.01)。4.下调CK18表达可促进MCF-7细胞发生EMT。MCF-7/siNC上皮细胞特征明显,而CK18下调组间质细胞特征明显。与MCF-7细胞相比,MCF-7/siNC细胞的迁移和侵袭、细胞-基质粘附能力、EMT标志蛋白的表达变化不明显,差异均无显著性(P0.05),而CK18下调组细胞迁移和侵袭能力增强(P0.01),细胞-基质粘附能力减弱(P0.001),上皮标志蛋白E-cadherin mRNA及蛋白表达水平降低(P0.05),间质特异蛋白(N-cadherin、vimentin)mRNA和蛋白水平表达显著增强(P0.01)。5.CK18可能通过EMT经NF-κB/Snail和NF-κB/Claudin1通路调控BCRP介导的乳腺癌MDR。与MCF-7相比,MCF-7/si NC细胞中NF-κB p65、Snail、Claudin1mRNA水平及蛋白表达变化不明显,差异无显著性(P0.05),而CK18下调组细胞中上述基因水平及蛋白表达均显著增加(P0.05)。结论:1.CK18参与了BCRP介导的乳腺癌MDR。2.CK18可能通过EMT经NF-κB/Snail和NF-κB/Claudin1通路调控BCRP介导的乳腺癌MDR。
【图文】：

模型图,表达作用,硕士学位论文,乳腺癌

山西医科大学硕士学位论文5 结论. CK18 参与了 BCRP 介导的乳腺癌的 MDR。. CK18 可能通过 EMT 经 NF-κB/Snail 和 NF-κB/Claudin1 通路调控 BC癌 MDR，，如 Fig.16 所示。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

【参考文献】