钙网蛋白在胆囊癌组织中表达及对胆囊癌细胞生物学行为影响

发布时间：2020-04-08 20:11

【摘要】：目的:探讨钙网蛋白(calreticulin CRT)在胆囊癌组织中表达及其对GBC-SD细胞株生物学行为的作用。方法:利用免疫组织化学及RT-qPCR测定胆囊癌组织、癌旁组织和慢性胆囊炎组织中CRT蛋白和mRNA的表达。利用小干扰RNA转染技术沉默GBC-SD细胞株CRT表达,通过Western blotting方法检验转染效果,Cell counting kit-8(CCK-8)及平板克隆实验测定细胞的增殖能力;应用流式仪测定GBC-SD细胞株的凋亡情况及细胞周期的改变;运用划痕及Transwell小室测定GBC-SD细胞株的迁移情况;Western blotting方法检测p-Akt及MMP-9蛋白表达。结果:与肿瘤旁及慢性胆囊炎标本比较,CRT mRNA在胆囊癌标本中高表达(t=5.571,P0.05)。siCRT-1、siCRT-2实验组24h及48h相对存活率分别为(71.5±6.3)%,(79.5±2.7)%;(62.6±8.8)%,(55.6±2.6)%。空白组,阴性对照组,siCRT-1,siCRT-2的凋亡率分别为(3.0±1.8)%,(4.7±1.3)%,(13.6±1.0)%,(20.0±4.0)%。划痕实验显示:空白组,阴性对照组,siCRT-1,siCRT-2的划痕修复率分别为(0.67±0.02),(0.58±0.02),(0.22±0.01),(0.37±0.04)。Transwell结果显示,空白组,阴性对照组,siCRT-1,siCRT-2的细胞穿膜个数分别为(301.8±10.7),(296.6±14.5),(178.0±10.1),(165.2±12.0)。与空白组及阴性对照组比较,siCRT-1,siCRT-2实验组24h,48h相对存活率明显降低,凋亡上升,迁移能力下降(F=29.310,118.618,69.651,144.515,190.145,P0.05)。沉默CRT相关基因后,与空白组及阴性对照组相比,p-Akt及MMP-9蛋白表达程度均下降。结论:CRT在胆囊癌中高表达,CRT表达下调介导的胆囊癌生物学行为的改变可能与p-Akt/MMP-9通路相关。
【图文】：

9 1 CRT 蛋白及 mRNA 在胆囊癌、癌旁及慢性胆囊炎组织中的表达情况（免疫组化 x100）； 和 1B：CRT 在胆囊癌癌旁组织中阳性表达；1C 和 1D：CRT 在慢性胆囊炎组织中低表达 和 1F：CRT 在胆囊癌组织中强阳性表达；1G：CRT 在胆囊癌中 mRNA 表达

3.结果3.1. 沉默 CRT 抑制胆囊癌细胞增殖及克隆形成：特异性沉默 CRT 表达后，利用CCK-8实验检测CRT对胆囊癌细胞增殖影响，，结果显示：siCRT-1及siCRT-作用 GBC-SD 细胞 24、48h 后，相对存活率分别（71.5±6.3）%，（79.5±2.7）%（62.6±8.8）%，（55.6±2.6）%，与空白对照组及阴性对照组比较，siCRT-及 siCRT-2 实验组相对生长率下降，差异有统计学意义（F=29.310 ，118.618，P<0.05）；平板克隆形成实验显示，与空白组与阴性对照组比较，siCRT-1 及siCRT-2 组降低 GBC-SD 细胞克隆能力，提示沉默 CRT 的表达抑制胆囊癌细胞的增殖及克隆能力（图 2）。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.8

【参考文献】

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本文编号：2619783