BCMab1-MnPs复合体的制备及在膀胱癌细胞检测中的应用研究

发布时间：2020-04-13 20:20

【摘要】：[目的]本研究以膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)细胞为研究对象,通过构建BCMab1-MnPs复合体,检测其在膀胱尿路上皮癌患者尿液脱落细胞中的特异识别能力,并初步评估它在膀胱尿路上皮癌尿脱落细胞早期无创检查方面的临床应用价值。[方法]1.利用间接偶联法,在免疫磁珠上包被单克隆抗体BCMab1,制备膀胱癌免疫磁珠(BCMab1-MnPs)后,将微量膀胱尿路上皮癌EJ细胞与正常膀胱上皮细胞HCV29悬液混匀,再通过免疫磁性细胞分离,进行细胞免疫学鉴定,检测BCMab1-MnPs的特异性及敏感性。2.选取了 2016年6月至2018年3月期间因怀疑膀胱肿瘤收治于昆明医科大学第二附属医院的患者,经膀胱镜活检或术后病理诊断为膀胱尿路上皮癌的71名患者纳入本研究,设为肿瘤组;并选取20名非泌尿系肿瘤的患者作为对照组。分别采用NMP22法、BTA法、BCMab1-MnPs法、传统尿脱落细胞学检测两组患者尿液样本,采用SPSS19.0软件计算4种检测方法的敏感度和特异度,从而比较这四种尿液检测方法以及不同组合联合诊断膀胱尿路上皮癌的准确性。应用秩和检验分析四种检测方法与患者临床病理特征之间的关系。并初步评估BCMab1-MnPs复合体在临床应用上的价值。[结果]1.包被BCMab1的免疫磁珠能与膀胱尿路上皮癌EJ细胞敏感而特异地结合,当正常膀胱上皮细胞与EJ细胞比为5×105:1时可检测到癌细胞。2.四种不同的尿液检测方法(NMP22、BTA、BCMab1、尿脱落细胞)检测同一例患者尿液标本,发现BCMab1-MnPs拥有通过尿液检测膀胱癌最高的敏感性:92.96%,同时具有最高的特异性:100%。3.BCMab1-MnPs法对于低分级膀胱尿路上皮癌的检测敏感度最高,为76.47%,,而在高级别膀胱尿路上皮癌中的敏感度为98.18%,两者差别有统计学意义(p=0.009),同时在其他标记物中也发现这种趋势。4.NMP22、尿脱落细胞法对于不同病理分期膀胱尿路上皮肿瘤的检测存在差别,二者对于高分期膀胱尿路上皮癌的诊断敏感度明显优于低分期组(p0.05),而BTA、BCMab1-MnPs对于不同分期膀胱尿路上皮癌诊断的敏感度则无明显差异。5.尿液中BTA浓度与膀胱尿路上皮癌病理分级、分期成正相关,并且结果具有统计学差异(P0.05)。6.NMP22、BTA、BCMab1-MnPs三种联合检测敏感度、特异度分别为:95.77%、85%。[结论]实验发现BCMab1-MnPs作为一种新型的、高敏感度、高特异度的免疫磁珠,具有对膀胱尿路上皮癌细胞识别度高,特异性强,灵敏度好,操作便捷、无创等优点,有望在将来成为一种尿脱落细胞学早期诊断膀胱尿路上皮癌的新方法。
【图文】：

磁珠,细胞,单抗

山羊抗小鼠ｌｇＧ免疫磁珠与单克隆抗体ＢＣＭａｂｌ偶联后，结合上ＢＣＭａｂｌ单抗的逡逑磁珠与ＦＩＴＣ标记的兔抗鼠抗体结合良好，，荧光显微镜下可见制备的ＢＣＭａｂｌ－ＭｎＰｓ逡逑复合体表面有明显的均匀的绿色荧光，而对照组空白磁珠镜下无荧光，说明逡逑ＢＣＭａｂｌ单抗已与磁珠表面的活性基团结合，并具有良好的生物学活性。逡逑３．邋２邋ＩＭＢ特异性检测逡逑

磁珠,细胞,磁力,洗脱

？邋！逡逑？逡逑图１１．ＨＣＶ２９细胞不与免疫磁珠结合，磁力架洗脱前磁珠呈散在分布（Ｘ２０）逡逑ｒ＂逦ｉ逦ｉ－ｕ．、逡逑ｋ逡逑４逡逑ｊ逡逑：逡逑广邋Ｖ＊＇．．邋．邋．．．．邋＇邋－．逦－邋ｆｅ邋？＞＇■逦，ｖ．逡逑图邋１２逦（Ｘ２０）逦图邋１３逦（ｘ邋１００）逡逑图１２、１３．经磁力架洗脱后光镜下很少见磁珠逡逑１５逡逑
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.14

【参考文献】