调控组胺信号促前列腺癌细胞凋亡的研究

发布时间：2020-04-20 18:31

【摘要】：研究目的:1、研究组胺信号通路相关分子-组氨酸脱羧酶(HDC)和组胺受体分子在前列腺癌中表达情况及意义;2、研究组胺H3受体(H3R)对前列腺癌细胞增殖、转移和凋亡的影响及机制。研究方法:1、应用免疫组织化学染色法检测前列腺癌组织以及正常前列腺组织组氨酸脱羧酶表达水平;2、运用RT-PCR及western blot检测组氨酸脱羧酶和组胺受体在前列腺癌细胞中的表达;3、应用免疫组织化学方法检测前列腺癌组织和正常前列腺组织H3R的表达情况;4、使用特异性H3R的激动剂、拮抗剂来调节H3R的功能或者构建干扰组胺H3受体表达的载体,通过瞬时转染法在内源性H3R高表达的细胞株下调H3R的表达;5、进行体外侵袭实验和迁移实验,检测H3R对前列腺癌细胞侵袭力和迁移力的影响;6、利用CCK-8细胞增殖实验检测H3R对前列腺癌细胞增殖的影响;7、利用流式细胞技术,采取细胞凋亡检测试剂盒检测H3R对前列腺癌细胞凋亡的影响;8、利用western blot检测抑制H3R后凋亡相关蛋白的表达情况和下游可能发生变化的蛋白情况;9、通过裸鼠皮下成瘤实验观察H3R对前列腺癌细胞成瘤能力的影响。研究结果:1、免疫组织化学染色结果表明,前列腺癌组织中的组氨酸脱羧酶染色的强度明显高于正常的前列腺组织(P0.05);2、m RNA和蛋白水平检测结果提示,前列腺癌细胞株(PC-3、LNCa P、22RV1及C4-2)组氨酸脱羧酶和4种组胺受体的表达水平同样明显高于对照细胞株RWPE-1,其中以H3R升高最显著(P0.05);3、免疫组化结果显示前列腺癌组织中H3R染色强度明显高于正常前列腺组织,Gleason评分高的组织比Gleason评分低的组织升高更显著(P0.05);4、体外迁移和侵袭实验表明干扰H3R的功能之后,前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力均下降;5、体外细胞增殖实验表明,干扰H3R的功能之后,前列腺癌细胞的增殖能力明显下降(P0.05);6、流式检查结果显示,干扰H3R的功能之后,前列腺癌细胞的凋亡明显增强;7、Western blot检测发现,干扰H3R的功能之后,凋亡相关蛋白BAX明显增加,抗凋亡蛋白BCL2明显降低,AR表达明显降低;8、裸鼠皮下成瘤实验显示,干扰H3R的功能之后,前列腺癌细胞的成瘤能力及肿瘤生长能力明显降低(P0.05)。结论:1、前列腺癌中HDC和4种组胺受体表达明显上调(P0.05);2、调节组胺受体H3R可影响雄激素受体AR的表达;3、组胺受体H3R信号通路对前列腺癌细胞的增殖、转移和凋亡有重要影响。综上,H3R在前列腺癌中可能起到促癌的作用,因此干扰前列腺癌中H3R的功能可能成为一种新的治疗策略。
【图文】：

前列腺病,蛋白,腺癌,前列腺癌

表 1 芯片中不同前列腺组织的 HDC 蛋白阳性表达。Table 1 HDC protein expression of different prostate tissues in the chip.前列腺病理 HDC 表达差异性- + ++ +++前列腺癌(n=39)0 11 16 12P<0.01正常前列腺组织(n=8)5 3 0 0

组胺受体,细胞系,基因,蛋白

33图2 组胺受体基因HRH1-4和HDC在RWPE-1、PC-3、LNCaP、22RV1细胞系RNA和蛋白（protein）水平的表达情况（＊P<0.05，＊＊P<0.01）。Fig.2 Expression of histamine receptor genes HRH1-4 and HDC in RWPE-1, PC-3, LNCaP,22RV1 cell lines in RNA and protein levels (＊P <0.05,＊＊P <0.01).讨论组胺和组胺受体广泛分布于人体组织中，，像肺、胃肠道和皮肤等，并且参与各种生理和病理过程，如皮肤过敏反应，各种胃肠道反应，脓毒症和神经传递。早期研究发现组胺在肿瘤的形成和转移中发挥重要作用，许多研究认为组胺会促进肿瘤的生长和转移[15]。通过统计多个数据库，也有学者发现组胺受体基因和肿瘤存在相关性[16]。由于组胺受体拮抗剂可以阻断组胺的作用，而组胺受体拮抗剂已经长时间用于临床治疗多种疾病，像 H1 受体拮抗剂用于治疗过敏
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.25

【参考文献】