TMPRSS4协同CLDN1调控肝癌增殖和侵袭转移机制研究

发布时间：2020-04-24 13:48

【摘要】：目的:1)探讨TMPRSS4及CLDN1在肝癌中的表达,与肝癌临床特征及预后相关性;2)探讨TMPRSS4及CLDN1对肝癌增殖、侵袭转移能力的影响,并完善可能存在的机制。方法:1)收集肝癌标本89例,并通过qPCR方法检测TMPRSS4及CLDN1在肝癌组织标本及肝脏组织标本中的表达,并分析TMPRSS4、CLDN1表达水平与肝癌患者临床特征和预后之间的相关性。2)应用以慢病毒为载体的过表达技术或sh-RNA改变TMPRSS4表达,利用MTT、Transwell技术、流式细胞仪、Westernblot技术明确其与肝癌增殖、转移相关性,在肝癌中进一步讨论TMPRSS4与肿瘤干性的相关性。3)应用以慢病毒为载体的过表达技术或sh-RNA改变CLDN1表达,利用MTT、Transwell技术、流式细胞仪、Westernblot技术明确其与肝癌增殖、转移相关性,探讨CLDN1与肝癌干性相关性,并完善TMPRSS4与CLDN1之间调控关系;结果:1)TMPRSS4及CLDN1的表达水平在肝癌组织中明显上调,同时在正常的肝组织中低表达。并且TMPRSS4及CLDN1表达均与肝癌预后相关。过表达TMPRSS4、CLDN1的肝癌患者生存期短,而低表达TMPRSS4、CLDN1者生存期长,相关性分析提示二者在肝癌中表达具有正相关性;2)RT-PCR和Western bolt结果显示:TMPRSS4可介导肝癌增殖,并增强侵袭转移能力,并且可促进肝癌细胞获得干性;3)进一步研究CLDN1是否可以影响肿瘤增殖、侵袭转移能力,发现低表达CLDN1可降低肝癌细胞株hepG2与Huh7体外增殖能力,而过表达CLDN1肝癌细胞增殖能力增强,体内试验证实CLDN1下调的细胞株生长能力减弱,而过表达CLDN1细胞成瘤能力增强;Transwell试验结果显示,CLDN1低表达细胞转移、侵袭能力减弱,而过表达者细胞其侵袭、转移能力增强。这与CLDN1的表达实现,进一步发现TMPRSS4/ERK/CLDN1信号通路发挥促癌作用,促使肿瘤细胞获得干性。结论:本课题研究发现,TMPRSS4与CLDN1在肝癌细胞及组织中表达上调,可被认为是原癌基因,并且TMPRSS4与CLDN1过表达的患者其生存期短,相关性分析提示二者之间存在正相关。体内及体外研究发现,CLDN1在肝癌中发挥着原癌基因的作用,可增强肝癌细胞生长、侵袭、转移潜能,并且CLDN1表达水平受TMPRSS4正相调控。本研究的结果使我们更加清晰的认识了TMPRSS4及CLDN1在肝细胞癌中的生物学功能,为其今后可能成为一个新的治疗靶点奠定了一定的基础。
【图文】：

并以GAPDH为对照，检测TMPRSS4与CLDN1表达含量。研究结果显示，CLDN1在正常的肝组织中表达阳性率低25.5%（14/55），而在肝细胞肝癌中为65.2%（58/89），差异具有统计学意义（图1-1A，表1-2，P<0.001）。为了研究TMPRSS4在肝癌中的表达，我们首先分析了TMPRSS4在肝癌组织和非肝癌组织中的表达情况，发现TMPRSS4在肝癌组织高表达（65/89），，而在非肝癌组织中低表达（17/55），差异具有统计学意义（图1-1B，表1-3

结果表明二者均在肝癌中高表达，在肝组织中低表达，并且TMPRSS4阳性主要表现在细胞质及细胞膜表面呈棕黄色深染，CLDN1阳性表现为细胞膜表面呈弥漫性浅黄色染色（图1-2A）。因TMPRSS4与CLDN1均在肝癌中高表达，且在文献中提示TMPRSS4增高则的CLDN1表达水平可增高，可能二者之间存在某种相关性，故我们进一步通过spearman 相关性检验分析二者之间相关性，结果发现TMPRSS4及CLDN1之间存在正相关（图1-2B，r=0.375，P<0.01）。图1-2 免疫组化结果显示TMPRSS4与CLDN1在肝癌组织及非肝癌组织中的表达水平；BTMPRSS4与CLDN1之间存在相关性Fig. 1-2（A）IHC staining demonstrated the expression level of TMPRSS4 and CLDN1 in HCCand normal liver tissues（NT）（.B）Spearman assays analyzed the correlation between TMPRSS4and CLDN1 in HCC.
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7

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本文编号：2639028