【摘要】：目的:前期实验研究发现,通过相应的激动剂、抑制剂调节TRPV6蛋白及mRNA的表达,可以使结肠癌SW480细胞内Ca~(2+)水平发生相应的变化,从而影响结肠癌SW480细胞的增殖、迁移及其凋亡。我们通过观察沉默TRPV6基因后对结肠癌SW480细胞内Ca~(2+)浓度变化和生物学行为的影响以及TRPV6对SD大鼠结肠肿瘤发生、发展的影响,希望能够进一步探索TRPV6在结肠癌发生、发展过程中的相关机制及作用,为结肠癌的预防及治疗寻找新的机制及治疗靶点。方法:(1)TRPV6基因沉默对结肠癌SW480细胞内钙和生物学行为的影响:利用上海吉凯公司设计TRPV6干扰序列,片段合成后构建慢病毒RNA干扰(RNA interference,RNAi)表达载体,随后将其包装成成熟慢病毒颗粒去感染结肠癌SW480细胞,经嘌呤霉素抗性选择培养后,建立稳定表达TRPV6-RNAi的SW480细胞株,通过免疫组化法、Western-Bolt、PCR技术验证其转染成功并有效抑制TRPV6蛋白及mRNA的表达,并用细胞增殖实验(MTT比色法)、细胞划痕及细胞凋亡实验观察TRPV6基因沉默后对结肠癌SW480细胞内Ca~(2+)的浓度变化和对其增殖、迁移及凋亡的影响。(2)TRPV6对SD大鼠结肠肿瘤发生、发展的影响:选用SD大鼠55只,随机分为5组,其中干预组每组10只(分别为DMH+1,25(OH)_2D_3组、DMH+CaCl_2组、DMH+CuCl_2组),DMH组15只,对照组10只。DMH+1,25(OH)_2D_3组每周予以DMH(20mg/kg)腹腔注射,同时予以1,25(OH)_2D_3 37.5nmol/kg灌胃,隔日一次;DMH+CaCl_2组每周予以DMH(20mg/kg)腹腔注射,同时予以CaCl_2 37.5mmol/kg灌胃,隔日一次;DMH+CuCl_2组予以DMH(20mg/kg)每周一次腹腔注射,同时予以CuCl_2 375umol/kg灌胃,隔日一次;DMH组每周仅予以DMH(20mg/kg)腹腔注射,并予相同剂量的生理盐水灌胃;对照组腹腔注射相同剂量的生理盐水,每周一次,同时予同等剂量的生理盐水灌胃,分别在第18周、20周及22周处死一批老鼠。通过HE染色了解模型构建情况,Western-Blot印迹方法检测各组大肠中TRPV6蛋白的表达。结果:(1)TRPV6-RNAi组能够下调结肠癌SW480细胞内Ca~(2+)浓度,与两对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);(2)TRPV6-RNAi组能够抑制结肠癌SW480细胞的增殖、迁移并诱导其凋亡,与两对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。(3)对照组大鼠大肠均未见肿瘤发生,实验组及干预组存活的37只大鼠中有25只大鼠成功诱发大肠肿瘤,成瘤率为67.6%,其中DMH+1,25(OH)_2D_3组的成瘤率为100%,DMH组的成瘤率为84.62%,DMH+CaCl_2组的成瘤率为50%,DMH+CuCl_2组的成瘤率为33.33%。(4)通过Western Blot印迹方法检测TRPV6蛋白在各组中均有表达,DMH组、DMH+1,25(OH)_2D_3组、DMH+CaCl_2组、DMH+CuCl_2组TRPV6蛋白的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);DMH组TRPV6蛋白的表达高于DMH+CaCl_2组、DMH+CuCl_2组,且差异有统计学意义(P0.05),而DMH+CaCl_2组与DMH+CuCl_2组比较,差异无统计学意义(P0.05);DMH组+1,25(OH)_2D_3组TRPV6蛋白的表达高于DMH组,且差异有统计学意义(P0.05)。结论:(1)TRPV6-RNAi转染结肠癌SW480细胞后,使结肠癌SW480细胞内Ca~(2+)浓度降低,并抑制结肠癌SW480细胞增殖、迁移及诱导其凋亡。(2)1,25(OH)_2D_3可以使实验鼠结肠组织TRPV6蛋白表达增加,并促进结肠肿瘤的形成。(3)CaCl_2、CuCl_2可以使实验鼠结肠组织TRPV6蛋白表达降低,并抑制结肠肿瘤的形成。
【图文】：
遵义医学院硕士学位论文 谢2 实验结果2.1 TRPV6-RNAi 转染结肠癌 SW480 细胞后形态的变化在倒置显微镜下观察 TRPV6-RNAi 转染 72h 后结肠癌 SW480 细胞形态变化，对照组和阴性对照组结肠癌 SW480 细胞融合成单层，细胞为梭形、多边形或三角同时可见较多的处于分裂相的细胞，细胞密度大。TRPV6-RNAi 组结肠癌 SW4胞形态出现细胞皱缩、间隙增大、变圆等凋亡的表现，细胞密度比空白组和阴性组明显减低，，且培养基中的悬浮死亡细胞较多（图 1）。
图 2 TRPV6-RNAi 转染结肠癌 SW480 细胞后 TRPV6 的表达;注：A：空白对照组，B：阴性对照组；C：TRPV6 RNAi 组。表 2 各组结肠癌 SW480 细胞中 TRPV6 的表达（ ±s ）。分组 空白对照组 阴性对照组 TRPV6-RNAi 组TRPV6 0.469±0.021 0.472±0.028 0.157±0.025*注：与空白对照组及阴性对照组进行比较*P＜0.05。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.35
【参考文献】
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6 朱蒙;杨学军;;钙信号在恶性肿瘤侵袭迁移中的作用[J];国际肿瘤学杂志;2014年03期
7 那键;马超;霍维玲;秦瑞云;吴晓东;许永;王涛;谷贵山;;新型Ca~(2+)通道TRPV5和TRPV6的研究进展[J];吉林大学学报(医学版);2013年03期
8 郭蒙;叶华;朱宇珍;吴琼;郑学宝;;结肠癌化学造模方法研究进展[J];中国药理学与毒理学杂志;2013年02期
9 何建林;郑仕中;陆茵;徐长安;唐旭;易瑞灶;;癌细胞中钙离子通道的研究进展[J];中国药理学通报;2012年07期
10 李世林;王怀鹏;蔡伟山;;TRPV离子通道家族在人精液生殖细胞中的表达及定位[J];临床医学工程;2011年07期
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2 张慧;TRPV5、TRPV6对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响[D];遵义医学院;2015年
3 邓元生;TRPV6在原发性肝细胞癌中的表达及意义[D];中南大学;2010年
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