低温常压等离子体对不同亚型乳腺癌细胞的影响及机理研究

发布时间：2020-05-13 00:14

【摘要】：乳腺癌由于其高度异质性而被分成多种亚型。在乳腺癌众多的亚型中,三阴性乳腺癌恶性程度高,缺少有效的靶向治疗手段,患者预后很差。虽然化疗药物可以对其进行治疗,但同时会给患者带来巨大痛苦。针对三阴性乳腺癌开发有效且低毒副作用的靶向治疗药物和新型治疗方法是乳腺癌研究工作者十分重要的任务。低温常压等离子体近年来作为一种新兴的抗肿瘤手段逐渐为人们所熟知,已经在超过二十种癌症类型的细胞中被证明具有抗肿瘤作用,而且低温常压等离子体与现有抗肿瘤药物在肿瘤治疗上有良好的协同作用,甚至在临床层面上,低温常压等离子体也有治愈癌症晚期患者的案例。大多数研究专注于探究正常细胞和癌细胞对低温常压等离子体的敏感性差异,却很少有研究者关注同一种癌症的不同亚型细胞对低温常压等离子体的敏感性是否有差异。本研究以一株正常乳腺上皮细胞系MCF10A为对照细胞,使用两株管腔型乳腺癌细胞系MCF7和BT474,四株三阴性乳腺癌细胞系SUM149、SUM159、MDAMB231和MDAMB468来探究不同亚型乳腺癌细胞对低温常压等离子体是否存在敏感性差异。主要结果如下:(1)比较了低温常压等离子体直接处理和等离子体激活培养基(plasma-activated medium,PAM)两种方式得到的细胞活性结果稳定性,确定了PAM处理方式作为后续实验的处理手段;比较了相同血清比例情况下,不同培养基制备的PAM对多种细胞的细胞活性的影响,排除了培养基的差异对实验结果的影响;(2)对七株细胞系进行PAM处理,检测其细胞活性,凋亡比例和迁移能力,发现PAM能够抑制其细胞活性,诱导其发生凋亡,抑制其迁移能力,而对正常乳腺细胞和管腔型乳腺癌细胞影响很小;检测MCF7和MDAMB231在PAM处理前后胞内MAPK信号通路相关蛋白磷酸化水平的变化,发现PAM可以通过抑制JNK的磷酸化来抑制MDAMB231的细胞活性;(3)SUM149和SUM159的ALDH1~+细胞比例显著高于MCF10A和MCF7;PAM能够显著降低SUM149和SUM159的ALDH1~+细胞比例,抑制其自我更新能力,而对MCF10A和MCF7影响很小;PAM不影响ALDH1在mRNA水平和蛋白水平上的表达量,推测PAM可能通过影响ALDH1蛋白的翻译后修饰过程来降低SUM149和SUM159中的ALDH1~+细胞比例,或者是杀死了更多的ALDH1~+细胞;(4)阿伐他汀能够抑制三阴性乳腺癌细胞的细胞活性,但是对其迁移能力影响很小;PAM能和阿伐他汀产生协同作用进一步抑制三阴性乳腺癌细胞的细胞活性。
【图文】：

第二章 材料与方法等离子体设备与处理等离子体设备等离子体发生装置如图 2-1 所示，其中图 2-1A 为低温常压，，图 2-1B 为低温常压等离子体设备实物图。低温常压等离 1~1.4 kV，频率 8.8 kHz，高纯氦气流量 1 L·min-1，培养基.3cm。石英管内气体被高压击穿放电，产生等离子体，随着下端口喷出形成低温常压等离子体射流，如图 2-1C 所示。

图 2-2 低温常压等离子体处理方式示意图Fig.2-2 Schematic representation of the cold atmospheric plasma treatmeA. 直接处理方式，B. 间接处理方式性实验照每孔 1×104个细胞接种于 96 孔板中，细胞贴壁后，根据操作；常压等离子体单独实验部分，将不同孔细胞分为对照组和实体直接处理的方式对 96 孔板内的细胞进行处理一定时间；式，将培养基按照每孔 100 μL 加到 96 孔板（10~50 s）或者（1~5 min），使用低温常压等离子体处理一定时间，得到 PA验组中的旧培养基替换为 PAM，对照组中的旧培养基则更用药部分，将不同孔细胞分为对照组和药物组，每组中的培换为新鲜培养基，并加入与药物组等量的溶解药物的溶剂，药物的新鲜培养基；
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

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本文编号：2661052