GJ-51805调控RARγ介导的抗癌机制
发布时间：2020-05-21 08:33
【摘要】：肝癌(HCC)在中国的发病率居所有恶性肿瘤的第四位,其死亡率高达第二位。因此,肝癌的预防和治疗尤为重要。视黄酸受体(RARγ)作为核受体超家族中的一员,其在介导细胞增殖、分化、凋亡、周期调控等生物学过程中发挥着重要的作用。RARγ作为一个促癌因子在肝癌中是高度表达的,这种促癌作用不依赖于对其转录活性的调节而是依赖于其非基因型功能。RARγ的非基因型功能有望成为癌症治疗的一个新的策略。在此,我们希望可以找到调控RARγ的化合物进一步研究其非基因型抗癌机制。通过MTT、流式、克隆形成、细胞划痕、免疫荧光等实验,发现氮杂吲哚类化合物GJ-51802和GJ-51805具有很好的抗肿瘤效果。GJ-51802和GJ-51805可以抑制肝癌细胞的增殖:GJ-51802和GJ-51805的IC50分别是7.5μM和2.5 μ。GJ-51802和GJ-51805可以抑制肝癌细胞的迁移,下调迁移标志物MMP2的表达水平。两个化合物在一定程度上引起细胞的早期凋亡和晚期凋亡:诱导PARP切割,激活Bax促凋亡蛋白。另外,GJ-51802和GJ-51805显著阻滞细胞周期于G2/M期,下调CDK1的表达。我们猜想,这可能与肝癌中高度表达的RARy有关。经检测,GJ-51802和GJ-51805可以以浓度依赖性和时间依赖性的方式下调RARγ。通过报告基因及蛋白水解策略,发现RARγ可能是GJ-51805的潜在靶点。CO-IP实验证明,GJ-51805可以破坏RARy和CDK1的相互作用,免疫荧光实验证明RARγ和CDK1存在共定位现象。因此,此论文通过筛选,得到具有抗肿瘤活性的氮杂吲哚类化合物GJ-51805,其可以显著阻滞细胞周期于G2/M期,调节RARγ并破坏RARγ和CDK1的相互作用。这可能是其发挥抗癌作用的机制。
【图文】：
第二种受体均可以与视黄素Ｘ受体形成异源二聚体，如甲状腺激素受体；第三逡逑种则是孤儿核受体［９］。逡逑经研究证明核受体是由六个部分构成（如图１）邋［１＜）１，从Ｎ端到Ｃ端分别使逡逑用了前６个英文字母来表示。其中在Ａ／Ｂ区域的序列、长度和结构属于多变区，逡逑Ａ／Ｂ中含有（转录活化区）ＡＦ１，该区能够和多种转录因子产生相互作用而激活逡逑目标基因。Ｃ区有两个锌指结构，是结构上较为保守的部分，为ＤＮＡ的结合区。逡逑Ｄ区能够使核受体蛋白发生构型的改变，属于一个比较多变的铰链区，核定位信逡逑号多出现于这一区域。Ｅ区占据了整个核受体的大部分空间，因此它也具有相对逡逑复杂的功能，比如它可以作为激素的结合区，该区域也被叫做（转录活化区）ＡＦ２。逡逑在核受体的Ｃ末端Ｆ区构成多变，具体的功能在该区域目前并未发现。机体的逡逑激素变化能够影响核受体所处的状态［１（）］。逡逑ＤＮＡ邋Ｂｉｎｄｉｎｇ逦Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ邋Ｄｏｍａｉｎ逡逑逦ＡＦ－１逦Ｄｏｍａｉｎ邋＜ＤＢＤ）逦Ｌｉｇａｎｄ邋Ｂｉｎｄｉｎｇ邋Ｄｏｍａｉｎ邋（ＬＢＤ）邋ＡＦ－２逡逑Ｎ－｜邋—邋Ａ／Ｂ逦Ｉ邋Ｃ邋—Ｅ邋…逦Ｉ邋Ｆ邋卜。逡逑图１．核受体结构域示意图逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ：逦Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｎｕｃｌｅａｒ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ逡逑摘自：Ｍｃｅｗａｎ
ＧＪ－５１８０２－ＨＣ１。按照上述浓度梯度相同条件下处理后，通过ＭＴＴ进行检测。发逡逑现，ＧＪ－５１８０２－ＨＣ１的ＩＣ５Ｇ在３邋［ｉＭ左右。因此，，我们初步推测，ＧＪ－５１８０２的活逡逑性低于ＧＪ－５１８０５的原因可能是其溶解度低于ＧＪ－５１８０５的溶解度（图２Ｃ）。逡逑在ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１这两株肝癌细胞中，我们做了克隆形成实验。逡逑ＧＪ－５１８０２和ＧＪ－５１８０５的加药浓度分别是０．５邋ｐＭ、１邋ｐＭ和０．１邋ｎＭ和０．２邋ｎＭ，经逡逑过１％的血清加药处理１５天后，细胞已经长成克隆。我们可以很清楚的观察到，逡逑在这两株肝癌细胞中ＧＪ－５１８０２和ＧＪ－５１８０５均可以很好地抑制肿瘤细胞的增殖逡逑（图邋２Ｄ，图邋２Ｅ）。逡逑３２逡逑
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
【图文】：
第二种受体均可以与视黄素Ｘ受体形成异源二聚体，如甲状腺激素受体；第三逡逑种则是孤儿核受体［９］。逡逑经研究证明核受体是由六个部分构成（如图１）邋［１＜）１，从Ｎ端到Ｃ端分别使逡逑用了前６个英文字母来表示。其中在Ａ／Ｂ区域的序列、长度和结构属于多变区，逡逑Ａ／Ｂ中含有（转录活化区）ＡＦ１，该区能够和多种转录因子产生相互作用而激活逡逑目标基因。Ｃ区有两个锌指结构，是结构上较为保守的部分，为ＤＮＡ的结合区。逡逑Ｄ区能够使核受体蛋白发生构型的改变，属于一个比较多变的铰链区，核定位信逡逑号多出现于这一区域。Ｅ区占据了整个核受体的大部分空间，因此它也具有相对逡逑复杂的功能，比如它可以作为激素的结合区，该区域也被叫做（转录活化区）ＡＦ２。逡逑在核受体的Ｃ末端Ｆ区构成多变，具体的功能在该区域目前并未发现。机体的逡逑激素变化能够影响核受体所处的状态［１（）］。逡逑ＤＮＡ邋Ｂｉｎｄｉｎｇ逦Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ邋Ｄｏｍａｉｎ逡逑逦ＡＦ－１逦Ｄｏｍａｉｎ邋＜ＤＢＤ）逦Ｌｉｇａｎｄ邋Ｂｉｎｄｉｎｇ邋Ｄｏｍａｉｎ邋（ＬＢＤ）邋ＡＦ－２逡逑Ｎ－｜邋—邋Ａ／Ｂ逦Ｉ邋Ｃ邋—Ｅ邋…逦Ｉ邋Ｆ邋卜。逡逑图１．核受体结构域示意图逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ：逦Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｎｕｃｌｅａｒ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ逡逑摘自：Ｍｃｅｗａｎ
ＧＪ－５１８０２－ＨＣ１。按照上述浓度梯度相同条件下处理后，通过ＭＴＴ进行检测。发逡逑现，ＧＪ－５１８０２－ＨＣ１的ＩＣ５Ｇ在３邋［ｉＭ左右。因此，，我们初步推测，ＧＪ－５１８０２的活逡逑性低于ＧＪ－５１８０５的原因可能是其溶解度低于ＧＪ－５１８０５的溶解度（图２Ｃ）。逡逑在ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１这两株肝癌细胞中，我们做了克隆形成实验。逡逑ＧＪ－５１８０２和ＧＪ－５１８０５的加药浓度分别是０．５邋ｐＭ、１邋ｐＭ和０．１邋ｎＭ和０．２邋ｎＭ，经逡逑过１％的血清加药处理１５天后，细胞已经长成克隆。我们可以很清楚的观察到，逡逑在这两株肝癌细胞中ＧＪ－５１８０２和ＧＪ－５１８０５均可以很好地抑制肿瘤细胞的增殖逡逑（图邋２Ｄ，图邋２Ｅ）。逡逑３２逡逑
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
【参考文献】
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1 刘瀚e
本文编号：2674001
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