miR-34a在地方性肺癌细胞XWLC-05和YTMLC中的作用及其靶位点

发布时间：2020-05-21 19:38

【摘要】：目的:本研究的主要目的是探讨mi R-34a在地方性肺腺癌细胞株XWLC-05、肺鳞癌细胞株YTMLC及其他非小细胞肺癌细胞株中的表达情况,并探讨mi R-34a在地方性肺腺癌细胞株XWLC-05、肺鳞癌细胞株YTMLC以及普通肺腺癌细胞株H157的增殖、迁移、侵袭中的作用并验证其在非小细胞肺癌(NSCLC)XWLC-05和YTMLC中的相关靶蛋白。方法:复苏并传代人地方性肺癌细胞株XWLC-05、YTMLC,普通肺癌细胞株H157,将XWLC-05、YTMLC、H157三株细胞分为三个组,分别为空白对照组、阴性对照组、实验组。实验组采用p GCMV/EGFP-hsa-mi R-34a mimics进行转染;阴性对照组采用脂质体介导空质粒p GCMV/EGFP-NC进行转染;空白对照组不做任何处理。采用RT-PCR检测mi R-34a在多种肺癌细胞株中的相对表达量;采用划痕试验比较各组细胞的迁徙能力;每组样本的侵袭能力采用Trans-well法来检测;采用MTT试验比较各组细胞的增殖能力;对于凋亡的定性测定使用透射电镜实验方法;对各组样本凋亡的相对数量进行定量检测采用流式细胞术试验方法。使用实时荧光定量PCR检测每个组细胞中m RNA表达情况;通过蛋白质印迹法对各组细胞中靶基因(Pten、YY-1和CDK-6、C-MET)蛋白的表达量进行检测;结果:将肺上皮细胞BEAS-2B作对照,mi R-34a在XWLC-05、YTMLC、H157、A549几株非小肺癌细胞中表达情况都相对较低。实验组(转染mimics-34a)细胞相对于空白组和阴性对照组来说,其生长能力远低于空白组和阴性对照组;侵袭能力明显减弱;显微镜下也可以明显看出实验组细胞的迁移能力明显降低;而流式细胞术检验出细胞的凋亡比值明显升高。在XWLC-05、YTMLC非小肺癌细胞株中,转染组细胞中mi R-34a的表达上调,CDK6的m RNA表达水平及蛋白水平下调(P0.05),而PTEN、YY-1的m RNA及蛋白的表达水平提高(P0.05),C-MET无统计学意义。结论:过表达的mi R-34a可抑制肺癌细胞的生长及迁移,其相关靶蛋白的上调或下调提示mi R-34a可作为肺癌治疗的分子靶点。Mi R-34a可能通过直接或者间接的调控路径,上调或下调与癌症发生发展相关的重要蛋白因子(PTEN、YY1、CDK6),从而实现对癌细胞迁徙、转移等行为的抑制。而与普通肺癌细胞株H157相比,XWLC-05和YTMLC细胞株在细胞功能与分子功能上与其无明显差异,宣威肺腺癌(XWLC-05)和个旧肺鳞癌(YTMLC)与普通肺癌相比是否有明显的生物学差异需要进行更加深入的研究。
【图文】：

microRNAs调控机制图

miR-34a在地方性肺癌细胞XWLC-05和YTMLC中的作用及其靶位点

miRNAs在不同类型癌症中的表达情况
【学位授予单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2

【参考文献】