抗人TIM-3单克隆抗体的体外生物学功能研究

发布时间：2020-06-19 20:30

【摘要】：目的 TIM-3分子有多个配体,各个配体与TIM-3的生物学功能之间的关系尚存争议。我们对已获得的抗人T细胞免疫球蛋白和粘蛋白-3(TIM-3)单克隆抗体(mAb)4E8及9H7进行体外生物学功能研究,借以阐述TIM-3抗体的体外免疫增强功能与其可否与特定TIM-3配体竞争结合是否存在相关性,从而为深入研究TIM-3抗体靶向TIM-3分子的作用机制及靶向TIM-3分子的肿瘤免疫治疗提供实验基础及科学依据。方法采用细胞转染技术获得表达人TIM-3分子的细胞系L929-human TIM-3,间接免疫荧光染色及流式细胞术检测抗人TIM-3 mAb 4E8及9H7与人TIM-3分子结合的能力;同时,ELISA检测4E8阻断人TIM-3融合蛋白(TIM-3 Ig-hu Fc)与半乳糖凝集素-9(galectin-9,Gal-9)结合的能力;流式细胞术检测4E8或9H7阻断TIM-3 Ig-huFc与293T-CEACAM-1瞬时表达细胞表面癌胚抗原相关黏附分子1(CEACAM-1)结合的能力及4E8或9H7阻断TIM-3 Ig-huFc与凋亡细胞表面TIM-3配体磷脂酰丝氨酸(PtdSer)结合的能力;混合淋巴细胞反应(MLR)及ELISA检测TIM-3 m Ab 4E8及9H7对CD4~+T细胞分泌白介素-2(IL-2)及干扰素-γ(IFN-γ)的影响。结果通过对稳定表达人TIM-3分子的细胞L929-human TIM-3的间接免疫荧光染色,验证了4E8及9H7均可与人TIM-3分子特异性结合。Gal-9与TIM-3结合实验结果显示,4E8可阻断TIM-3与Gal-9的结合。但CEACAM-1或Ptd Ser与TIM-3结合实验结果显示,4E8不可阻断TIM-3与CEACAM-1或PtdSer的结合而9H7既可阻断TIM-3与CEACAM-1的结合又可阻断TIM-3与PtdSer的结合。MLR实验结果显示,4E8及9H7均可增强CD4~+T细胞分泌IL-2的能力,且与PD-1抗体nivolumab有协同作用,差异有统计学意义(P0.05)。此外,4E8及9H7均可增强CD4~+T细胞分泌IFN-γ的能力,且4E8与PD-1抗体nivolumab具有显著的协同效果,差异有统计学意义(P0.05)。结论本项研究发现TIM-3 mAb 4E8可阻断TIM-3与Gal-9的结合,不可阻断TIM-3与CEACAM-1或PtdSer结合。此外,4E8具有增强CD4~+T细胞分泌IL-2及IFN-γ的能力且与PD-1 mAb具有协同效果,但4E8对CD4~+T细胞的作用不依赖于阻断TIM-3与其配体CEACAM-1或PtdSer的结合。TIM-3 mAb 9H7可阻断TIM-3与CEACAM-1及PtdSer的结合,具有增强CD4~+T细胞分泌IL-2作用且与PD-1 mAb具有协同效果。同时也可增强CD4~+T细胞分泌IFN-γ的能力。以上数据表明,TIM-3抗体的体外免疫增强功能与是否竞争特定TIM3配体结合不存在相关性。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R730.51

【参考文献】