miR-10b对食管癌细胞自噬的调控机制的研究

发布时间：2020-06-20 08:24

【摘要】：由于饮食结构的特殊性,食管癌是我国发病率较高的消化系统恶性肿瘤,食管癌(EC)是一组异质性恶性肿瘤,死亡率高且不易早期诊断。即使治疗手段多种多样,但是产生的副作用严重,对人体伤害大。自噬可以说是捕获细胞内蛋白质和细胞器并在溶酶体中降解它们的过程,降解分解产物从溶酶体释放并再循环到代谢和生物合成途径中。基底自噬通过消除受损的细胞成分来维持蛋白质和细胞器的控制,饥饿诱导的自噬将细胞内成分循环至代谢途径以维持线粒体代谢功能和能量稳态。自噬在癌症发展过程中扮演什么样的角色,是人类孜孜不倦研究的方向。miRNAs是一类长约19-24 nt的小型ncRNAs。miRNAs通过与靶mRNAs的3'-UTRs区的完全或不完全互补结合,使靶向mRNA降解或翻译抑制从而负向调节目标基因的表达。而microRNA将自噬与癌症联系起来,是否能做为精准治疗的靶点利用自噬原理治疗癌症也是不无可能的。本课题找到一种microRNA可以在食管癌细胞中靶向特定基因,从而影响细胞自噬和细胞增殖、迁移和侵袭。本研究提出miR-10b可以促进食管癌细胞KYSE450和KYSE510自噬。而且我们通过生物信息学找到了 miR-10b靶基因DAZAP1,并在分子水平和蛋白水平检测确认,且敲掉靶基因DAZAP1后同样促进食管癌细胞自噬。与此同时通过一系列生物功能实验,发现DAZAP1会抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。已有文献报道DAZAP1经常参与剪切过程,通过RNA-seq,我们发现在沉默DAZAP1后TSC2长链表达量的增加和短链的减少,而短链因为S981位点的缺失,会通过影响TSC2的磷酸化水平降低从而抑制mTOR的活化,这也完美的解释了 miR-10b促进自噬的机制。所以,我们可以确定miR-10b和DAZAP1为肿瘤精准治疗的生物靶点。
【学位授予单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.1
【图文】：

北京化工大学硕士学位论文逡逑结合，促进货物隔离。自噬体和溶酶体融合后，释放水解酶来降解小分子。降解逡逑后产生的氨基酸，核苷，脂肪酸和糖被再释放到细胞质中用于回收【１１］（图１－１）。逡逑自噬对于防止受损蛋白质和细胞器的毒性积累，维持新陈代谢，能量稳态和饥饿逡逑生存至关重要。自噬对循环铁蛋白也很重要，而自噻缺陷会引起铁稳态扰动，增逡逑加对氧化应激的敏感性ｔ１２，ｌ３］。逡逑一门邋＼邋１邋／逦Ｑ逡逑图１－１自噬发生的过程【１１］逡逑Ｆｉｇ．１－１邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ邋ａｕｔｏｐｈａｇｙ邋１１１１逡逑１．１．２自噬的检测方法逡逑（１）用ＷＢ手段对ＬＣ３和Ｐ６２蛋白的检测逡逑用于检测自嗤的手段最经典最不可避免的是用Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ方法检测ＬＣ３逡逑和Ｐ６２蛋白的变化。逡逑ＬＣ３蛋白（微管相关蛋白轻链３）是在自噻发生过程中定位在自噬体膜上的逡逑非常重要的蛋白［１４］。自噬阶段一部分细胞质，包括细胞器，被隔离膜（也称为逡逑吞噬细胞）封闭。在该膜的延伸时，ＬＣ３蛋白在其Ｃ－末端被切割以形成胞质ＬＣ３－Ｉ；逡逑然后将该蛋白质与磷脂酰乙醇胺缀合以形成ＬＣ３－１Ｉ，ＬＣ３－Ｉ丨有助于封闭膜以形成逡逑自噬体，自噬体最终与溶酶体融合。然后溶酶体水解酶降解它们在自噬溶酶体中逡逑的底物。在Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ电泳步骤中

北京化工大学硕士学位论文逡逑结合，促进货物隔离。自噬体和溶酶体融合后，释放水解酶来降解小分子。降解逡逑后产生的氨基酸，核苷，脂肪酸和糖被再释放到细胞质中用于回收【１１］（图１－１）。逡逑自噬对于防止受损蛋白质和细胞器的毒性积累，维持新陈代谢，能量稳态和饥饿逡逑生存至关重要。自噬对循环铁蛋白也很重要，而自噻缺陷会引起铁稳态扰动，增逡逑加对氧化应激的敏感性ｔ１２，ｌ３］。逡逑一门邋＼邋１邋／逦Ｑ逡逑图１－１自噬发生的过程【１１］逡逑Ｆｉｇ．１－１邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ邋ａｕｔｏｐｈａｇｙ邋１１１１逡逑１．１．２自噬的检测方法逡逑（１）用ＷＢ手段对ＬＣ３和Ｐ６２蛋白的检测逡逑用于检测自嗤的手段最经典最不可避免的是用Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ方法检测ＬＣ３逡逑和Ｐ６２蛋白的变化。逡逑ＬＣ３蛋白（微管相关蛋白轻链３）是在自噻发生过程中定位在自噬体膜上的逡逑非常重要的蛋白［１４］。自噬阶段一部分细胞质，包括细胞器，被隔离膜（也称为逡逑吞噬细胞）封闭。在该膜的延伸时，ＬＣ３蛋白在其Ｃ－末端被切割以形成胞质ＬＣ３－Ｉ；逡逑然后将该蛋白质与磷脂酰乙醇胺缀合以形成ＬＣ３－１Ｉ，ＬＣ３－Ｉ丨有助于封闭膜以形成逡逑自噬体，自噬体最终与溶酶体融合。然后溶酶体水解酶降解它们在自噬溶酶体中逡逑的底物。在Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ电泳步骤中

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本文编号：2722145