P53抑制Fascin蛋白活化进而抑制结直肠癌转移的分子机制研究

发布时间：2020-06-22 05:01

【摘要】：P53突变对癌症进展有着重要作用。Fascin是一种肌动蛋白集束蛋白,近来发现它可以通过帮助癌细胞形成细胞突起如丝状伪足和侵袭性伪足,从而促进癌细胞转移和侵袭。但是P53和Fascin的关系并不清楚。目的:明确P53和Fascin在结肠腺癌细胞转移中的作用及其机理。方法:选取浙江大学医学院附属邵逸夫医院自2004年2月到2006年6月期间手术的75例结直肠腺癌患者(排除术前放化疗的患者);直接DNA测序检测P53突变状态;IHC检测P53、Fascin、E-cadherin、NF-κB等蛋白表达。免疫荧光观察细胞骨架结构和Fascin、E-cadherin的表达;transwell培养系统分析肿瘤细胞迁移能力;Western blot 检测 Fascin、NF-κB 调节因子、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin等肿瘤转移相关蛋白表达;用RT-PCR检测NF-κB靶点基因IKKα和IKKβ;用RNA干扰和腺病毒转染技术观察P53/P65过表达和低表达对Fascin的影响。结果:我们的研究发现他们之间的一个新的联系。在结直肠腺癌中,P53和NF-κB、Fascin的低表达以及E-cadherin的高表达相关。并且这种表达情况和患者的生存预后较好密切相关。P53野生型可以抑制NF-κB的活性,从而抑制Fascin表达和癌细胞侵袭。我们进一步分析发现,NF-κB是P53缺失刺激Fascin表达的关键因素。在P53缺失的细胞中,用化学药物或者P65siRNA抑制NF-κB/P65表达可以抑制Fascin的活性。并且修复P53基因表达后,抑制了 NF-κB信号通路,减少了 Fascin的激活。结论:这些数据提示一个负反馈环路的存在,P53可以通过抑制NF-κB介导的Fascin激活抑制结直肠癌细胞侵袭。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.34
【图文】：

患者,结直肠腺癌,生存曲线

dFasein"和Fascia的结直肠腺癌患者的Kaplan-Meier生存曲线

结直肠腺癌,连续切片,突变型,野生型

低表达显著相关逡逑为了明确尸突变和癌症侵袭相关的基因之间的关系，我们进一步用免疫组逡逑化的方法检测了结直肠癌标本的Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白（图２ａ）和ＮＦ－ｋＢ蛋白（图２ｂ）逡逑的表达。结果发现，大部分尸５３突变的肿瘤与Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白的低表徶（５３／５３，邋１００％）逡逑和Ｆａｓｃｉｎ蛋白的高表达（３２／５３，邋６０．４％）显著相关。而户５３野生型与Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白逡逑的高表达和Ｆａｓｃｉｎ蛋白的低表达显著相关（表２），提示突变可能通过调节逡逑Ｆａｓｃｉｎ和Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白诱导了邋一种功能获得性转移性表型。逡逑－逡逑．邋．邋＇逡逑＇逡逑■：逦＇逦：．．．八逡逑：邋‘邋．邋．邋．邋．逡逑图２ａ邋野生型（左）和突变型（右）的结直肠腺癌标本连续切片的Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ逡逑蛋白的免疫组化结果，故大比例：２０0ｘ逡逑丨：．、＇Ｉ逡逑：逡逑图２ｂ尸５３野生型（左）和突变型〔右）的结直肠腺癌标本连续切片的ＮＦ－ｋＢ逡逑蛋白的免疫组化结果，放大比例：２０0ｘ逡逑３０逡逑

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