紫草素增强非小细胞肺癌对吉非替尼的敏感性及作用机制研究

发布时间：2020-07-03 04:50

【摘要】：目的:观察紫草素联合吉非替尼对非小细胞肺癌细胞增殖的影响,探讨其可能的作用机制。方法:1.Western blot检测不同浓度吉非替尼处理A549细胞6h、12h后PKM2的表达水平;2.CCK-8检测紫草素和/或吉非替尼对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用;3.流式细胞术检测紫草素和/或吉非替尼对非小细胞肺癌细胞生长周期改变及对细胞凋亡的影响;4.Western blot检测紫草素和/或吉非替尼处理A549细胞12h后PKM2表达水平,以及相关蛋白分子表达水平的变化;5.CRISPR/Cas9法建立细胞系A549/PKM2~-。结果:1.细胞型态改变不同浓度紫草素和/或吉非替尼作用A549、H1299不同时间,细胞数量明显减少,且细胞间距增大、胞体变圆缩小,出现明显的细胞凋亡现象,并具有明显时间和剂量依赖性。2.细胞周期变化紫草素与吉非替尼联合用药组较对照组、吉非替尼组G0/G1期细胞百分数增加,G2/M期细胞百分数减少,联合用药对细胞周期的影响最明显,差异具有统计学意义。3.细胞凋亡改变紫草素与吉非替尼联合用药能有效诱导A549、H1299发生凋亡,凋亡率明显高于对照组、吉非替尼组,差异有统计学意义。4.PKM2表达改变用紫草素或吉非替尼处理A549细胞后,耐药蛋白PKM2的表达水平均较对照组发生变化,其中单独用10μg/ml吉非替尼处理A549细胞12h时,PKM2表达水平明显增强;而高浓度紫草素和吉非替尼联合用药,细胞中PKM2表达水平显著下降。5.PKM2敲除的影响PKM2敲除的A549细胞对吉非替尼敏感性较A549有所提高,差异具有统计学意义。结论:紫草素能够增强非小细胞肺癌对吉非替尼的敏感性,其作用机制与下调PKM2的表达水平有关。
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2
【图文】：

紫草素

图 1 不同浓度吉非替尼对不同 NSCLC 细胞增殖抑制作用hibitory effect of gefitinib at different concentrations on proliferation of N图 2 不同浓度紫草素对不同 NSCLC 细胞增殖抑制作用hibitory effect of shikonin at different concentrations on proliferation of N

紫草素,蛋白质定量,影响度,细胞

11图 2 不同浓度紫草素对不同 NSCLC 细胞增殖抑制作用hibitory effect of shikonin at different concentrations on proliferation of N替尼对 PKM2 表达的影响度 0、5、10μg/ml 的吉非替尼分别处理 A549 细胞 6h胞总蛋白，Bradford 法进行蛋白质定量，制备相同浓度blot 法检测 PKM2 表达，结果如图 3。由图 3 可见，用处理 A549 细胞 12h 时，细胞中 PKM2 的表达量显著

【参考文献】